噬菌體展示技術將基因型和表型統(tǒng)一于同一噬菌體顆粒,相較于傳統(tǒng)的抗體制備技術,提供了不經(jīng)免疫制備抗體的可能,可以解決因為弱抗原、自身抗原、具有毒性的抗原等抗體制備的困難。因此也是目前抗體庫制備中應用十分廣泛的一項技術。
一個好的噬菌體抗體庫需要具備較大的容量和良好的多樣性,如果庫容量較小,則難以獲得高親和力的抗體。那么想要獲得較大庫容和多樣性豐富的噬菌體文庫,有哪些可以優(yōu)化的因素呢?
一、選擇高轉(zhuǎn)化效率的大腸桿菌(感受態(tài)細胞)
噬菌體文庫的庫容會受大腸桿菌轉(zhuǎn)化效率的限制,選擇高效率的電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞,能有效的增加噬菌體文庫的庫容,另外也可以通過增加轉(zhuǎn)化次數(shù)來累積庫容。在噬菌體展示文庫構建過程中,使用比較多的感受態(tài)細胞有TG1、XL1-Blue、SS320等。
在進行轉(zhuǎn)化實驗時,要想獲得高的轉(zhuǎn)化效率,質(zhì)粒/連接產(chǎn)物的純度、電轉(zhuǎn)的條件、質(zhì)粒/連接產(chǎn)物的加入量以及操作的規(guī)范性也是需要注意的地方。
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