MX12860 v.A

   DIGITONIN細胞質(zhì)膜通透處理液產(chǎn)品說明書 

主要用途

   DIGITONIN細胞質(zhì)膜通透處理液是一種旨在通過溫和的非離子性去垢劑處理，形成膜孔，獲得通透的常用技術(shù)方法。該方法經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。主要適用于各種免疫檢測、蛋白和分子轉(zhuǎn)運等的前處理。產(chǎn)品即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，效果明顯。

技術(shù)背景

細胞質(zhì)膜通透技術(shù)（plasma membrane permeabilization technique ）是一種使各種類型細胞的質(zhì)膜形成孔隙，從而獲得外源性分子進入細胞內(nèi)部，以控制細胞內(nèi)的生理活動的實驗技術(shù)。通常的通透方法包括電擊通透（electropermeabilization）、去垢劑通透、膜穿孔毒素（pore forming toxin）通透等。其中毛地黃皂苷（digitonin）是一種螺甾烷皂苷（SpirostanSaponin），分子式C₅₆H₉₂O₂₉ 溫和的非離子甾類糖苷（steroid glycoside）去垢劑，常用于膜蛋白或受體溶解、線粒體分離、膽固醇定量，以及質(zhì)膜通透。細胞通透后，形成較大的膜孔，允許較大的分子，例如酶、抗體等導入進細胞內(nèi)。用于各種檢測，包括免疫檢測，酶活檢測等。

產(chǎn)品內(nèi)容

  清理液（Reagent A）              毫升

  處理液（Reagent B）              毫升

產(chǎn)品說明書                 1份

保存方式

保存在—20℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

微型臺式離心機：用于樣品操作

操作步驟

一、 貼壁細胞處理

1． 準備1個細胞培養(yǎng)48孔板的待測細胞，細胞鋪滿率達70％

（注意：可以使用載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和其它培養(yǎng)孔板，見注意事項6）

2． 小心抽去細胞培養(yǎng)液

3． 小心沿著孔壁加入500微升  清理液（Reagent A）到1個細胞培養(yǎng)孔，覆蓋細胞表面

4． 小心抽去  清理液（Reagent A）

5． 小心沿著孔壁加入xx微升室溫預熱的  處理液（Reagent B）到1個細胞培養(yǎng)孔，覆蓋細胞表面

6． 室溫下孵育10分鐘

7． 小心抽去  處理液（Reagent B）

8． 小心沿著孔壁加入xx微升  清理液（Reagent A）到1個細胞培養(yǎng)孔，覆蓋細胞表面

9． 小心抽去  清理液（Reagent A）

10． 重復實驗步驟8至9二次

11． 繼續(xù)后續(xù)操作

二、懸浮細胞處理

1． 準備1管10⁶的待測細胞

2． 轉(zhuǎn)移到2毫升離心管

3． 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為2000g

4． 小心抽去細胞培養(yǎng)液

5． 小心加入xx微升  清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群

6． 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為2000g

7． 小心抽去  清理液（Reagent A）

8． 小心加入xx微升室溫預熱的  處理液（Reagent B），混勻細胞顆粒群

9． 室溫下孵育10分鐘

10． 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為2000g

11． 小心抽去  處理液（Reagent B）

12． 小心加入xx微升  清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群

13． 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為2000g

14． 小心抽去  清理液（Reagent A）

15． 重復實驗步驟12至14二次

16． 繼續(xù)后續(xù)操作

注意事項

1． 本產(chǎn)品為20次操作

2． 本產(chǎn)品可以用于免疫染色的通透處理、受體實驗、轉(zhuǎn)運實驗等

3． 操作時，須戴手套

4． 操作時，避免污染母液

5． 用戶根據(jù)細胞特性，可以稀釋  清理液（Reagent A）

6． 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應調(diào)整操作用量：

7． 本公司提供系列質(zhì)膜通透處理試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定通透穩(wěn)定