RPA(recombinase polymerase amplification)即重組酶聚合酶擴增技術(shù)，在ATP存在條件下，重組酶與引物結(jié)合, 形成蛋白-核酸聚合體，并搜索配對目標；當(dāng)引物尋找到配對DNA模板，ATP水解供應(yīng)能量，重組酶離開引物，并在DNA聚合酶的作用下合成新DNA鏈；同時，單鏈DNA結(jié)合蛋白( SSB)同被置換出來的DNA單鏈進行結(jié)合，防止DNA模板再次形成雙鏈。RPA實驗?zāi)茉诤愣囟认逻M行全程實驗，沒有復(fù)雜的操作，對儀器及人員的要求不高，適合基層或現(xiàn)場快速診斷。

相關(guān)產(chǎn)品：

HP80201 基礎(chǔ)型RAA核酸擴增試劑（凍干顆粒）

HP80202 熒光型RAA 核酸擴增試劑（凍干顆粒）

HP80203 基礎(chǔ)型RT-RAA核酸擴增試劑（凍干顆粒）

HP80204 熒光型RT-RAA核酸擴增試劑（凍干顆粒）

HP80205 試紙條型RAA核酸擴增試劑（凍干顆粒）

HP80206 試紙條型RT-RAA核酸擴增試劑（凍干顆粒）

RPA等溫擴增原理

1. 復(fù)合物A能夠在單鏈上尋找同源序列，并連接成環(huán)狀分子。

2. 單股DNA結(jié)合蛋白可以與單鏈DNA結(jié)合，防止其二級結(jié)構(gòu)形成，并引導(dǎo)聚合酶與模板結(jié)合。

3. DNA聚合酶負責(zé)在模板上合成新鏈DNA。

RPA的優(yōu)勢在于其等溫反應(yīng)、快速擴增和魯棒性，這使其非常適合POCT檢測。

RPA具有以下主要特征

1. 等溫反應(yīng)

RPA反應(yīng)在常溫(37-42°C)下進行，不需要熱循環(huán)設(shè)備，這使其可以應(yīng)用于簡易的POC診斷裝置中。

2. 快速反應(yīng)

RPA反應(yīng)只需要20-40分鐘，比PCR快幾倍，這可實現(xiàn)病原體 DNA的快速檢測。

3. 強大的擴增效率

RPA可以從少量模板DNA復(fù)制出109-1011個拷貝，擴增效率高達90%。

4. 高度特異性

RPA使用三個核酸酶(活動的復(fù)合體A、單股DNA結(jié)合蛋白及DNA聚合酶)實現(xiàn)序列特異性擴增，可檢出少至幾個拷貝的目標DNA。

5. 魯棒性

RPA可以在各種樣本中直接擴增(不需DNA精制)，對PCR的常見阻礙因素如血清、肉湯等也具有很好的耐受性。

6. 靈活性

RPA可直接從各種原始樣本中擴增DNA，也可以與其他技術(shù)如磁珠分離等結(jié)合，實現(xiàn)樣本的預(yù)處理。

RPA與PCR相比具有以下主要優(yōu)勢

1. 等溫反應(yīng)

RPA在常溫下進行，而PCR需要進行多輪的溫度變化循環(huán)，需要PCR儀等設(shè)備。RPA的等溫反應(yīng)更簡單，不需要昂貴設(shè)備，這有利于POC檢測的應(yīng)用。

2. 速度更快

RPA反應(yīng)只需20-40分鐘，而PCR通常需要2-3小時。RPA可以實現(xiàn)病原DNA的快速檢測，適用于臨床急癥檢測。

3. 更高擴增效率

RPA可以得到109-1011拷貝的擴增產(chǎn)物,擴增效率高達90%,而PCR的擴增效率一般在80-90%之間。

4. 魯棒性更強

RPA可以直接從各種原始樣本擴增，而PCR更加敏感，常需進行DNA精制或分離。RPA對PCR的常見干擾因子也更具耐受性。

5. 不產(chǎn)生二級片段

RPA擴增產(chǎn)物為單一片段,而PCR可能產(chǎn)生二級擴增片段,影響結(jié)果的準確性。

RPA也存在一定局限

1. 目前報道較少：與PCR相比，RPA的研究報道和應(yīng)用案例還比較少，相關(guān)技術(shù)和產(chǎn)品也較不成熟，有待進一步推廣。

2. 專一性較差：RPA的擴增效率高，但其對非靶DNA的擴增也較PCR更明顯，這會產(chǎn)生更高的假陽性信號，影響檢測精度。

3. 擴增片段較長：RPA獲得的擴增片段一般在100-1500bp之間，較PCR獲得的產(chǎn)物長，不利于某些下游檢測。

4. 定量性較弱：與實時熒光PCR相比，RPA的定量能力較差，不利于獲得準確的DNA定量結(jié)果。

RPA相比PCR，由于其等溫、快速、高效和魯棒等優(yōu)勢，更適用于簡易POCT檢測的應(yīng)用。但其專一性較差、擴增片段較長和定量性較弱等也是不容忽視的局限因素。