為了保證人ELISA試劑盒實驗的穩(wěn)定及順利完成,廣大科研者和經(jīng)銷商首先要考慮的就是產(chǎn)品的選擇,一定要選用質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品。其實,我們在使用ELISA試劑盒時,對自身以及對產(chǎn)品的要求都是很嚴格的;下面就為大家提供幾點參考
1.抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELNSA,實際上有時候二者結(jié)合效果更好。例如。對于雙抗夾心法而言,用多抗進行捕挾而單抗進行檢測有時更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。
雙抗夾心法BISA中捕獲抗體與檢測抗體〈不論多抗還是單抗)的周對很有講究。我們不希望輔獲抗體與檢測抗體競爭抗原上的同一位點,為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測抗體所識別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突,就會對實驗結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要蔽免這一問題,我i們門可以選擇購買“matched pair”的捕獲/檢測則抗體對,這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗證才推薦的好組合。
2.交叉反應
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應就會影響整個實驗的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應的一個因素。盡管現(xiàn)在購買源自動物的抗體越來越容易,我們?nèi)杂斜匾_認一下是否會產(chǎn)生交叉反應的問題。在用雙抗夾心法進行LISA檢狽時,檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗。而不能與捕獲抗體起反應·如果檢則用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實驗特異性就會大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗,來避免上述問題。
3.檢測方式
如今檢測BLISx有許多途徑,我們可以根據(jù)自己人EITSA式試就險的偏好進行選擇?!鉋LISA檢則的是酶促足反應的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應的癇(例伽如通常使用的辣根過氧化物酶JBP〉,而反應體系中添加有相應的底物《如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DNB〉。這種酶促反應生成具有特征性的顏色??梢酝ㄟ^分光光度計進行檢測。堿性硝酌酶-R也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈雷親和素標記的醇與親和素標記的一抗結(jié)合。此外BLISk的結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學發(fā)光或顯色法檢測等。
上海通蔚一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供科研試劑和完善的人ELISA試劑盒技術(shù)服務,滿足生物化學、分子生物學、細胞生物學、免疫學等生物科技實驗需求。
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