一、概念：

細(xì)胞凋亡：由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡，是高度調(diào)控的過程，故又稱為細(xì)胞的程序性死亡。

二、特征：

細(xì)胞壞死是病理狀態(tài)下由損傷因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的自溶現(xiàn)象，表現(xiàn)為：細(xì)胞皺縮變小、質(zhì)膜起泡、染色體凝縮、細(xì)胞核碎裂、DNA片段化以及吞噬體最終吞噬細(xì)胞。

圖1 細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死過程

三、檢測(cè)試劑盒

1、Annexin V/PI檢測(cè)試劑盒

根據(jù)細(xì)胞凋亡過程中的變化，可以通過多種途徑對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，目前市面上常用的試劑盒包括一下幾種：

Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（abs50001）

正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞發(fā)生凋亡最早期，PS由翻向外側(cè)，這一變化早于細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DNA片斷化和細(xì)胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象。Annexin V與ps有高度親和力，因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料, 它不能透過完整的細(xì)胞膜，但凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性的增加，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來。但由于Annexin V本身沒有熒光，因此需要偶聯(lián)熒光基團(tuán)，以便被流式細(xì)胞儀檢測(cè)，通常會(huì)偶聯(lián)FITC、eGFP、AF488、APC等基團(tuán)。

選擇原則：若細(xì)胞沒有自發(fā)熒光，可以選擇Annexin V-FITC/PI或Annexin V-eGFP/PI。這類試劑盒熒光光譜重疊較小，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)要求相對(duì)較低。

如果細(xì)胞本身需要檢測(cè)綠色熒光，可以選擇Annexin V-APC/PI或者Annexin V-APC/7AAD組合的試劑盒。但APC和PI的熒光光譜有較大重疊，對(duì)檢測(cè)儀器和技術(shù)人員有較高要求，如果細(xì)胞本身需要檢測(cè)紅色熒光，則應(yīng)確認(rèn)紅色熒光的激發(fā)光和發(fā)射光波長(zhǎng)，如果與PI/7AAD的激發(fā)光和發(fā)射光均相似，則不能用這類試劑盒檢測(cè)該細(xì)胞的凋亡。

2、TUNEL細(xì)胞凋亡試劑盒

TUNEL細(xì)胞凋亡試劑盒（綠色熒光）abs50047

TUNEL染色熒光圖（綠色）

細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA，基因組DNA雙鏈或單鏈斷裂時(shí)會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，3'-OH可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的催化作用下，與488/Cy-dUTP結(jié)合，從而通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀直接進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(Terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。

選擇指南：Tunel法可以對(duì)完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞核或凋亡小體進(jìn)行原位染色，可檢測(cè)出極少量的凋亡細(xì)胞，可用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。選擇性的檢測(cè)凋亡細(xì)胞，而非壞死細(xì)胞或因輻照和藥物治療而造成的DNA鏈斷裂的細(xì)胞。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)或涂片后在熒光顯微鏡下觀察。

3、Caspase 3/7 活性檢測(cè)試劑盒

Caspase 3/7活性檢測(cè)試劑盒(Caspase 3/7 Activity Assay Kit)是采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中caspase 3/7酶活性或純化的caspase 3/7酶活性的試劑盒。Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究最多的caspase。 本試劑盒原理基于Caspase 3/7都可以催化底物Ac-DEVD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA（對(duì)硝基苯胺），測(cè)定405nm附近pNA的吸光度。

4、線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒

JC-1是一種廣泛用于檢測(cè)線粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針?？梢詸z測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時(shí)，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)中，形成聚合物，可以產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時(shí)，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時(shí)JC-1為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測(cè)線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對(duì)比例來衡量線粒體去極化的比例。線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的標(biāo)志性事件。因此該試劑盒可以用于早期的細(xì)胞凋亡檢測(cè)。

*注：文中圖片來自網(wǎng)絡(luò)或參考文獻(xiàn)，僅供學(xué)習(xí)參考用

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