孕酮是一種內(nèi)源性類固醇和孕激素性激素，參與人類和其他物種的月經(jīng)周期、妊娠和胚胎發(fā)育。它屬于一類被稱為孕激素的類固醇激素，并且是體內(nèi)主要的孕激素。孕酮還是合成其他內(nèi)源性類固醇（包括性激素和皮質(zhì)類固醇）的重要代謝中間產(chǎn)物，并作為神經(jīng)類固醇在腦功能中發(fā)揮重要作用。EZElisa™孕酮（Pg）ELISA試劑盒采用競爭性抑制酶免疫測定技術(shù)。試劑盒中的微孔板已經(jīng)預(yù)包被了抗兔抗體。將標準品或樣品加入到適當?shù)奈⒖装蹇字?，加入特異性抗孕酮抗體和辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的孕酮。辣根過氧化物酶標記的孕酮與未標記的孕酮通過與抗體發(fā)生競爭性抑制反應(yīng)。加入底物溶液到孔中，顏色的發(fā)展與樣品中孕酮的含量相反。停止顏色的發(fā)展，并測量顏色的強度。

艾美捷EZElisa孕酮ELISA試劑盒基本參數(shù)：

目錄號：D-AEK0002

規(guī)格：48T/96T

儲存：在4°C下儲存12個月，避光。

檢測范圍：0.5 ng/mL-30 ng/mL

靈敏度：0.2 ng/mL

精密度：內(nèi)部精密度：變異系數(shù)（CV）＜15%。間接精密度：變異系數(shù)（CV）＜15%

回收率：回收率范圍為85%至115%，總體平均回收率為100%

特異性：EZElisa™孕酮（Pg）ELISA試劑盒對孕酮的檢測具有高靈敏度和優(yōu)異的特異性。未觀察到孕酮與類似物之間的顯著交叉反應(yīng)或干擾。

適用樣本：血清、血漿

供應(yīng)材料和儲存條件：

Note: Std1: 0 ng/mL; Std2: 0.5 ng/mL; Std3: 2 ng/mL; Std4: 6 ng/mL; Std5: 15 ng/mL; Std6: 30 ng/mL.

EZElisa孕酮ELISA試劑盒試劑準備：

注意：使用前將所有試劑平衡至室溫。如果緩沖濃縮液中形成了晶體，請輕輕加熱，直到它們完-全溶解。

1×洗滌緩沖液：將洗滌緩沖液（20×）用去離子水稀釋1:20，得到1×洗滌緩沖液。儲存在4°C。樣品制備

1.血清：使用血清分離管，在室溫下凝固樣品30分鐘，然后以1,000 g的速度離心15分鐘。立即使用血清進行檢測，或?qū)悠贩盅b并儲存于-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

2.血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑采集血漿。在采集后30分鐘內(nèi)以1,000 g的速度離心15分鐘。立即進行檢測，或?qū)悠贩盅b并儲存于-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。注意：不要使用明顯溶血或脂質(zhì)混濁的樣本。如果樣品在24小時內(nèi)使用，可以儲存在2至8°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。在進行檢測之前，冷凍樣品應(yīng)緩慢回溫至室溫，并輕輕混勻。

程序分析：

1. 從板框中取出多余的微孔板條，放回包含干燥劑包的鋁箔袋中，并重新密封。

2. 每個孔加入50 μL的孕酮標準品或樣品。建議將所有標準品和樣品都復(fù)制加入微孔板中。設(shè)置一個不加任何溶液的空白孔。

3. 向每個孔中加入50 μL的HRP偶聯(lián)的孕酮（不加入空白孔），然后按照相同的順序向每個孔中加入50 μL的孕酮檢測抗體。充分混勻后，使用提供的板蓋覆蓋孔板，然后在37°C下孵育1小時。

4. 倒掉每個孔中的液體并進行洗滌，總共重復(fù)三次洗滌過程。使用多通道移液器或自動微孔板洗滌器，將每個孔填滿1×洗滌緩沖液（250 μL），靜置10秒鐘，每個步驟完-全去除液體對于良好的性能至關(guān)重要。在最后一次洗滌后，倒轉(zhuǎn)孔板并在干凈的紙巾上輕拍，去除任何剩余的1×洗滌緩沖液。

5. 向每個孔中加入50 μL的底物A和50 μL的底物B，充分混勻并使用提供的板蓋覆蓋。在37°C下孵育15分鐘。將孔板放置在黑暗中，遠離氣流和其他溫度波動。

6. 向每個孔中加入50 μL的停止溶液。停止溶液應(yīng)按照HRP底物的順序加入孔板中?？字械念伾珣?yīng)從藍色變?yōu)辄S色。如果孔中的顏色是綠色，或者顏色變化不均勻，請輕輕敲擊孔板以確保充分混勻。

7. 在30分鐘內(nèi)使用設(shè)置為450 nm的微孔板讀數(shù)器測定每個孔的吸光度。

注：

1.不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合或替換。

2.為了避免交叉污染，在每個標準水平的添加之間和樣品之間更換移液管尖-端添加以及試劑添加之間。此外，每個試劑使用單獨的儲液器。

3.為了確保準確的結(jié)果，在培養(yǎng)步驟中需要適當粘附板蓋。

4.停止溶液具有一定的腐蝕性。操作時請采取防護措施

該試劑僅用于科學研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。