單胺氧化酶（MAO）檢測試劑盒（醛苯腙比色法）

產(chǎn)品貨號：BA1574

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

單胺氧化酶(Monoamine Oxidase，MAO)是一組催化多種單胺類化合物氧化脫氨的酶，屬于細(xì)胞外酶，含有銅離子，分布于肝臟、腎臟等組織的線粒體內(nèi)，其含量分布為肝臟＞心臟＞腎臟＞腦＞肺＞骨骼肌。血小板、胎盤中也含有MAO。線粒體中的MAO與膜緊密結(jié)合，僅少量為可溶性的，存在于細(xì)胞質(zhì)中，血液和結(jié)締組織中的 MAO為水溶性。

尚寶生物 單胺氧化酶 (MAO)檢測試劑盒 (醛苯腙比色法)其檢測原理是待測樣品在MAO作用下，氧化底物芐胺生成芐醛，后者經(jīng)催化反應(yīng)生成醛苯腙，呈棕紅色，通過分光光度計(jì)檢測470nm處吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可測出MAO活力。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 蒸餾水

2. 離心管或小試管

3. 比色杯

4. 分光光度計(jì)

使用方法：

1. 準(zhǔn)備樣品：

①血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測定，尿液通常也可以直接用于測定，-70℃凍存，用于MAO的檢測。

②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清， -70℃凍存，用于MAO的檢測。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的MAO，可以使用MAO Assay buffer稀釋。

④(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的MAO含量。

2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：用MAO Assay buffer稀釋芐醛標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L)至0.5mmol/L，即為芐醛標(biāo)準(zhǔn)工作液，4℃保存，備用。以芐醛標(biāo)準(zhǔn)工作液 (0.5mmol/L)，按下表制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3. MAO檢測：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。

4. 混勻，分光光度計(jì)470nm處檢測吸光度值，比色杯1.0cm光徑，以蒸餾水調(diào)零，讀取各管吸光度值。一般應(yīng)數(shù)小時(shí)內(nèi)檢測完畢。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)(A測定-A空白 )之差值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出MAO活力單位。酶活力高于上限者，應(yīng)將樣品稀釋后重新測定，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

計(jì)算：

MAO活性單位的定義：在37℃ 1ml血清中MAO 1h催化底物產(chǎn)生1nmol芐醛為一個MAO酶活力單位。根據(jù)酶活性定義，計(jì)算出樣品中的MAO活性。

以標(biāo)準(zhǔn)管芐醛nmol數(shù)為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用(A測定-A空白之差值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測樣品的芐醛nmol數(shù)。)

血清MAO活力(U/ml或nmol/h?ml)=芐醛(nmol)×V_T ×N/t×Vs =芐醛(nmol)×2.5

組織MAO活力(U/mg或nmol/h?mg)=芐醛(nmol)×V_T ×N/(t×Vs ×待測樣品蛋白濃度mg/ml)

式中：

V_T =待測樣品總體積(ml)

N=待測樣品檢測前的稀釋倍數(shù)

Vs =檢測時(shí)所用樣品體積(ml)

t=反應(yīng)時(shí)間(min)

注意事項(xiàng)：

1. 膽紅素濃度小于257μmol/L，血紅蛋白濃度小于4g/L，對MAO活力檢測沒有影響。

2. 若更換為國際單位，應(yīng)除以60。

3. 加入芐醛顯色緩沖液后，應(yīng)1h內(nèi)檢測完畢。

4. 在皂化過程中，震蕩不要劇烈，以免形成乳化層。

5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。