Duolink® 原位精簡操作指南

來源：上海牧榮生物科技有限公司 2023年11月27日 20:14

1.	封閉將封閉溶液添加至樣品中。孵育去除封閉溶液
2.	一抗將一抗在適當(dāng)?shù)木彌_液中稀釋，并添加至樣品中。孵育在合適的緩沖液清洗兩次，每次5分鐘
3.	將兩份PLA®探針，以1：5的比例在適當(dāng)?shù)木彌_液中稀釋，并添加至樣品中。 +37 °C孵育60分鐘用1 x洗滌液A清洗2次，每次5分鐘
4.	在H2O中以1：5的比例稀釋連接儲液。在該溶液中以1:40比例稀釋連接酶并將混合物添加至樣品中。 +37 °C孵育30分鐘用1 x洗滌液A清洗2次，每次2分鐘
5.	在H2O中以1：5的比例稀釋擴(kuò)增儲液。在該溶液中以1:80比例稀釋聚合酶并將混合物添加至樣品中。 +37 °C孵育100分鐘用1 x洗滌液B清洗2次，每次10分鐘用0.01x洗滌液B清洗1分鐘
6.	成像準(zhǔn)備使用含有DAPI的Duolink原位封固劑加載樣品，等待15分鐘，然后在熒光或共聚焦顯微鏡下進(jìn)行分析。注意：使用沒有蓋玻片的開放液滴反應(yīng)，并在加濕室中進(jìn)行所有孵育。請使用冷凍塊將酶從冷凍室（-20oC）中取出。應(yīng)在搖床上以最小體積（70毫升），并輕微搖晃進(jìn)行清洗。

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