Q1：核酸酶適用于哪些領(lǐng)域的哪些環(huán)節(jié)？

A1：核酸酶主要用于去除下游純化中的HCD，降低粘度。應(yīng)用領(lǐng)域主要集中在基因治療、細(xì)胞治療的病毒載體生產(chǎn)，使用環(huán)節(jié)是下游純化，UFDF環(huán)節(jié)之前。

Q2：核酸酶的使用濃度是多少？

A2：一般的病毒載體純化使用濃度是20-50 U/ml，溶瘤病毒的話使用濃度會高一些，可能會到100-150 U/ml。

Q3：蛋白不溶，需要在變性條件下純化，pannarase核酸酶可以在尿素環(huán)境下消化核酸么？

A3：核酸酶在6M尿素條件下活性先增加，當(dāng)尿素濃度到7M時，核酸酶會在15min后變性失活。因此在這個濃度下可適當(dāng)提高核酸酶添加量補償活性損失。

Q4：當(dāng)反應(yīng)溫度低于37℃，如何保證pannnarase的消化效果？

A4：體系固定的條件下，核酸酶的消化效果取決于酶的用量、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間。溫度較低時，建議延長酶解時間，避免加入過多核酸酶造成殘留過高。

Q5：怎樣滅活pannarase核酸酶？如何去除？

A5：使用EDTA螯合金屬離子可以可逆的抑制核酸酶的活性，條件會造成失活，如100mM NaOH，70℃處理30min等。核酸酶可采用陰離子交換柱從產(chǎn)物中分離出去。

Q6：產(chǎn)品應(yīng)如何進(jìn)行稀釋？

A6：正確稀釋比例是1：1000~1：20000，原儲存液中含有50%甘油，酶液不會在-20℃凍結(jié)，但在不含甘油的緩沖稀釋液中的酶需要盡快用掉，不推薦凍結(jié)后再次使用。

Q7:核酸酶的去除方法有哪些？

A7:切向流過濾、色譜法、濾器、陰離子層析等。

Q8:細(xì)菌或細(xì)胞裂解液里的核酸酶應(yīng)該如何去除？

A8:隨著工藝去除雜蛋白時會一并去除，不用特意純化 。

Q9:Pannarase耐高鹽核酸酶的來源與特點？

A9: Pannarase耐高鹽核酸酶(EC 3.1.31.1)是一種來源于Staphylococcus aureus的熱穩(wěn)定非特異性核酸內(nèi)切酶（Thermonuclease），具有耐鹽和高溫穩(wěn)定性。

Q10：耐高鹽核酸酶的鹽離子耐受范圍

A10：0-500 mM NaCl均能保持活性15%以上。