默克生命科學(xué) | DNA和蛋白質(zhì)去磷酸化操作流程

來源：上海杰星生物科技有限公司 2024年01月05日 09:44

去磷酸化指的是水解去除磷酸(PO43?)基團的過程。在對蛋白質(zhì)或DNA去磷酸化時，需要使用酶或水解酶切割酯鍵。例如，磷酸酶可將磷酸單酯水解為磷酸根離子和帶有游離羥基(OH)基團的分子，從而去除磷酸基團。默提供各類生命科學(xué)解決方案和服務(wù)

1.利用小牛腸堿性磷酸酶對DNA進行去磷酸化

材料

牛小腸堿性磷酸酶（貨號 P4978）
10X CIP緩沖液（貨號C3225）
1 M NaCl
0.5 M Tris-HCl，25 °C下pH 7.9
0.1 M MgCl2
0.01 M 二硫蘇糖醇

存儲緩沖液

10 mM Tris-HCl, pH 8.2
50 mM KCl
1 mM MgCl2
0.1 mM ZnCl2
50%甘油

操作流程：

*注意：苯酚提取或凝膠純化后無需再熱滅活。

熱滅活：對于牛腸酶，在5毫摩爾/升的乙二胺四乙酸下，加熱至75℃10分鐘，可使95%以上的活性失活。注意：大腸桿菌的堿性磷酸酶比牛腸酶在高溫下更穩(wěn)定，也更耐熱滅活。

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