無論是實驗室規(guī)模樣品制備、還是生產(chǎn)規(guī)模工藝過程，去除核酸都可以改善工藝流程，如蛋白純化、病毒載體制備、mNGS中樣品處理等過程。而核酸酶的選擇，就顯得特別重要。Heat Labile-Salt Active Nuclease (熱不穩(wěn)定性耐高鹽核酸酶，HL-SAN) 是一種非特異性內(nèi)切酶，在高鹽濃度下具有最佳活性；且該酶在多種緩沖液中都有活性，很容易通過還原劑處理而失活。這些特性使HL-SAN在需要去除DNA和RNA的應(yīng)用中，更為適合。核酸污染，特別是宿主基因組DNA污染，在幾乎所有工藝流程及生物制品的生產(chǎn)中，都是需要重點解決的問題。一方面，宿主DNA的存在，影響目標產(chǎn)物的純化及下游質(zhì)量分析等。另一方面，宿主DNA殘留能引起機體嚴重的免疫反應(yīng)，是生物制品的關(guān)鍵質(zhì)量參數(shù)之一，F(xiàn)DA及NMPA等對Host Cell DNA (HCD)有嚴格的質(zhì)控要求。宿主基因組DNA中，組蛋白與DNA形成核小體，核小體緊密折疊形成結(jié)構(gòu)復(fù)雜的染色質(zhì)。組蛋白與DNA間存在強烈的離子作用及疏水作用，再加上特殊的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致宿主DNA很難被準確檢測并清除。已有文獻表明，高鹽濃度下組蛋白與DNA解離相對，這有利于宿主DNA的檢測及去除。但市售的絕大多數(shù)核酸酶在高鹽濃度下活性很弱，甚至失活。而耐高鹽的HL-SAN成了這類應(yīng)用的理想選擇。

一，逐典耐高鹽全能核酸酶優(yōu)勢

1.更高鹽耐受度

當(dāng)鹽離子濃度在600~700mM時，初代全能核酸酶幾近失活，而SAN仍能保持較高活性。

圖1.不同鹽濃度下耐高鹽全能核酸酶(SAN)與初代全能核酸酶活性對比

2. 高效核酸降解力

同對照組相比，添加SAN后能夠有效去除核酸殘留。

圖2 加入SAN 前后的消化效果圖

二，逐典耐高鹽全能核酸酶用途

1.疫苗和病毒樣品制備中高鹽環(huán)境下DNA污染的去除

2.與細胞或細菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量。

3.減少存放的外周血單細胞(PBMC)的結(jié)塊現(xiàn)象

4.降解核酸，利于不可溶性蛋白復(fù)性前高質(zhì)量包涵體制備。

5.有效去除帶負電荷的核酸對雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響，改善蛋白質(zhì)分離效果，增強2-DE分辨率

三，使用指導(dǎo)

1. DNA去除方案

從細胞抽提物或細胞裂解液中去除DNA污染，HL-SAN的使用量受到多種因素影響，如細胞類型、裂解液組成、NaCl濃度、Mg2+濃度、裂解液pH等。參考方案見Figure 1。比如，對于1ml細胞裂解樣品，調(diào)整到0.3-0.75 M NaCl濃度，加入1000 U HL-SAN，15℃-37℃溫度條件下孵育30-60min，或者4℃過夜。Mg2+是必須的。

2.滅活

滅活是通過添加還原劑（TCEP或DTT）來實現(xiàn)的，推薦用TCEP（因為TCEP在磷酸鹽溶液中不穩(wěn)定，特別在中性pH下）。不同工藝流程中，通過改變孵育時間、溫度和還原劑的濃度等來滅活該酶。一般情況下， 25-37℃反應(yīng)5-10分鐘，可以滅活99%以上的酶。為了避免酶恢復(fù)活性、再次激活，保持低濃度還原劑，如0.1-0.5 mM DTT或TCEP，或延長滅活反應(yīng)時間。

四，客戶之聲