MAKLER 精子計(jì)數(shù)板使用說(shuō)明書(shū) 

一、描述：

Makler 精子計(jì)數(shù)板（腔室）是一種方便精子計(jì)數(shù)的設(shè)備，用于快速的精子計(jì)數(shù)、活動(dòng)性和形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)，可使用未稀釋的樣品。

計(jì)數(shù)板包括兩個(gè)部分：

1. 下面的主要部分有一個(gè)金屬基底（A）和兩個(gè)把手（H）。在基底的中心有一個(gè)光學(xué)平玻璃制的平盤(pán)（D），樣品放置其上。在平盤(pán)周?chē)兴膫€(gè)針（P）。他們的比平盤(pán)高10微米。

2. 上面部分是覆蓋玻璃（C）被一個(gè)金屬環(huán)環(huán)繞。在他的下表面中心有一個(gè) 1 mm平方的格子，被分成100個(gè)方格，每個(gè)是0.1 mm X 0.1mm 。當(dāng)覆蓋玻璃放置在四個(gè)針上時(shí)，在一行上的10個(gè)方格包圍的空間就是一毫升的百萬(wàn)分之一。因此，在10個(gè)方格里的精子頭數(shù)量代表著他們以 百萬(wàn)/mL 為單位的濃度。

二、腔室的準(zhǔn)備：

在把樣品放在平盤(pán)上之前，確保相對(duì)表面*清潔且無(wú)塵，因?yàn)榇蠖鄶?shù)顆粒的尺寸大于玻璃間的狹小空間。為了此目的，用鏡頭紙擦兩個(gè)表面。清潔度可以通過(guò)把覆蓋玻璃放置到四個(gè)針上，觀察四個(gè)接觸點(diǎn)彩色邊紋（Newton現(xiàn)象）來(lái)檢查。對(duì)著熒光燈可以看到的效果。

三、精液分析的方法：

充分混合樣品，注意避免產(chǎn)生氣泡。通過(guò)木棒或移液器的幫助，在平盤(pán)中心區(qū)域放置一小滴。用手指拿起覆蓋玻璃黑色點(diǎn)的相反面，并立即放在四根針上。輕柔按下，再次觀察彩色邊紋。液滴會(huì)在平盤(pán)的整個(gè)區(qū)域擴(kuò)散成厚度10微米的薄層。

只要針沒(méi)有被淹沒(méi)，多余的不會(huì)影響正常的分析。一旦覆蓋玻璃就位，避免觸摸、抬起以及再次覆蓋。因?yàn)檫@會(huì)改變腔室內(nèi)精子的平均分布。用把手拿起腔室并放置在顯微鏡平臺(tái)上?？赡苄枰们皇?jiàn)A頭來(lái)進(jìn)行固定。

四、特別注意事項(xiàng)

1，不要對(duì)此腔室使用40X 物鏡。這樣蓋玻片在聚焦時(shí)會(huì)被破壞。

2，即使使用合適的20X 物鏡，也要小心不要壓到覆蓋玻璃上。 一般當(dāng)物鏡末端距離表面1mm的時(shí)候，圖像是清晰的。如果因?yàn)椴徽_的使用顯微鏡導(dǎo)致覆蓋玻璃損壞，我們不會(huì)負(fù)責(zé)。

3，推薦使用20X 物鏡和10X 目鏡。不推薦使用10X 物鏡，因?yàn)榫涌雌饋?lái)會(huì)太小，除非用20X 目鏡。

五、精子計(jì)數(shù)：

如果精子太密集和活動(dòng)，他們首先需要被固定。這很容易做到，通過(guò)把樣品一部分轉(zhuǎn)移到另一個(gè)測(cè)試管。然后測(cè)試管插入50℃-60℃熱水中，大約5分鐘。一滴充分混合的，預(yù)熱的樣品放置在腔室上并蓋上覆蓋玻璃。在格子的方格里精子頭被計(jì)數(shù)，與血液學(xué)中計(jì)數(shù)血細(xì)胞的方法一樣。              

在此精子的數(shù)量是zui重要的，在連續(xù)一列10個(gè)方格里對(duì)其計(jì)數(shù)。數(shù)量代表了以 百萬(wàn)每毫升為單位的濃度。在其他一列或兩列里重復(fù)此操作，以測(cè)定平均值?？梢赃x擇用其他2或3滴樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)以提高計(jì)數(shù)的可靠性。在精子缺乏癥樣品中，推薦在整個(gè)格子區(qū)域計(jì)數(shù)。

在精子聚焦之后，移動(dòng)顯微鏡平臺(tái)把各自定位在視野中心。然后，調(diào)節(jié)腔室以使格子線處于水平和垂直位置。

在此搜索期間你可能會(huì)觀察到：

A）精子分別是否均勻？如果不是，樣品沒(méi)有混合好。

B） 是否所有精子都在一個(gè)聚焦平面，沒(méi)有模糊？如果不是，可能表面沒(méi)有清潔或兩個(gè)表面之間有大的顆粒。

任意情況，都要從開(kāi)始重復(fù)。

六、活動(dòng)性評(píng)價(jià)：

推薦在樣品準(zhǔn)備好3-5分鐘之內(nèi)進(jìn)行活動(dòng)性評(píng)價(jià)，以避免從周邊移動(dòng)過(guò)來(lái)的精子的干擾。計(jì)數(shù)9或16格內(nèi)所有不能動(dòng)的精子。然后計(jì)數(shù)相同區(qū)域內(nèi)能動(dòng)的精子且評(píng)估移動(dòng)等級(jí)+1到+4. 在格子的另一個(gè)區(qū)域重復(fù)此過(guò)程，以及另外3到4滴樣品并計(jì)算平均值。

這樣的評(píng)估比原始載玻片上的要很多，因?yàn)槟抢锞颖簧w玻片壓縮且活動(dòng)性被損害。Makler精子計(jì)數(shù)板提供了標(biāo)準(zhǔn)條件，對(duì)所有分析樣品精子都可以在一個(gè)光滑的水平面自由移動(dòng)。

七、形態(tài)學(xué)：

快速精子形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)可以從一個(gè)濕的未染色的樣品進(jìn)行，其包含固定的精子。推薦使用一個(gè)相差顯微鏡。在格子的一個(gè)特定區(qū)域計(jì)數(shù)所有正常和不正常精子，且從其他樣品重復(fù)此過(guò)程以達(dá)到總計(jì)數(shù)200。顯然，精子缺乏癥樣品掃描的精子數(shù)可以更低。腔室不適合染色的，干的樣品進(jìn)行形態(tài)學(xué)測(cè)定。

八、特殊情況：

氣泡：格子區(qū)域如果出現(xiàn)氣泡，推薦換一滴樣品，除非氣泡非常小，不影響分析。

大的灰塵顆粒，纖維等，也會(huì)通過(guò)改變空間大小來(lái)影響計(jì)數(shù)，也應(yīng)該更換一滴樣品。如果樣品沒(méi)有混合*，高度粘稠，或腔室有顆?；蚧覊m；在同一樣品不同滴之間計(jì)數(shù)會(huì)出現(xiàn)較大差別。

凝聚：在腔室里有時(shí)周?chē)木訒?huì)聚集，如果在計(jì)數(shù)之前過(guò)去了太久。這種情況下，更換此滴樣品為適當(dāng)混合的新樣品。在個(gè)別情況下，在格子區(qū)域內(nèi)會(huì)出現(xiàn)膠狀聚集，此時(shí)應(yīng)更換樣品。

結(jié)晶：樣品時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能包含晶體，可能不會(huì)影響計(jì)數(shù)，但使計(jì)數(shù)更困難。有時(shí)候，這些晶體太大，可能會(huì)損壞表面區(qū)域。因此，分析包含晶體的樣品時(shí)需特別注意。

九、為了重復(fù)使用的清洗和準(zhǔn)備：

不要用自來(lái)水淋洗或浸泡腔室。把刷子蘸水或非腐蝕性殺菌溶液，并擦玻璃的兩個(gè)面。然后，擠壓刷子擦掉剩下的水。zui后用無(wú)毛鏡頭紙擦干表面，盡量避免觸摸針的。腔室現(xiàn)在可以重復(fù)使用了。

一般來(lái)說(shuō)，一旦檢查固定，不需要改變聚焦。無(wú)需提高物鏡，簡(jiǎn)單的把腔室滑進(jìn)滑出即可。

十、附 件：

ü  清潔刷

ü  無(wú)毛鏡頭紙

ü  腔室?jiàn)A頭——在精子分析期間此設(shè)備應(yīng)該被放置在顯微鏡平臺(tái)上。緊緊夾住腔室使之可以在平臺(tái)上平滑移位。當(dāng)精子分析結(jié)束，握住夾頭把腔室滑出。要進(jìn)行新的精子分析，再次把腔室滑進(jìn)夾頭。

ü  英文說(shuō)明書(shū)