Q：可以單獨(dú)訂購(gòu)Nucleofector®試劑盒中的組分嗎？

A：Nucleofector®試劑盒僅作為完整的試劑盒提供，不單獨(dú)提供試劑盒中的任何組分。

Q：試劑盒中的Solution冷凍了，會(huì)有影響嗎？

A：只要Solution中沒(méi)有添加Supplement組分，就沒(méi)有影響，即使是幾個(gè)月的長(zhǎng)期儲(chǔ)存也不會(huì)改變Solution的性能。但是，如果添加Supplement后進(jìn)行了冷凍，檢查是否有沉淀物，如果存在沉淀物，需要進(jìn)行測(cè)試，以排查是否影響性能。

Q：Nucleofector®試劑盒中包含的pmaxGFP對(duì)照載體適合穩(wěn)定表達(dá)嗎？

您的pmaxGFP對(duì)照載體是否與Nucleofector®試劑盒一起提供，適合穩(wěn)定表達(dá)？

A：不適合。該載體僅作為陽(yáng)性對(duì)照使用，不能用于篩選，因?yàn)樗话溉閯?dòng)物選擇標(biāo)記。該載體表達(dá)的抗性基因是卡那霉素，只適合細(xì)菌篩選。

Q：有哪些方面可以優(yōu)化，提升DNA轉(zhuǎn)染T細(xì)胞后的活率？

A：盡量將DNA量保持在較低水平（例如，每100 µL反應(yīng)1µg質(zhì)粒DNA），因?yàn)檩^高的DNA量可能會(huì)導(dǎo)致毒性，增加死亡率；使用高純度的DNA也很重要，例如使用Endofree™ 質(zhì)粒試劑盒（Qiagen）；另外A260:A280的比例應(yīng)至少為1.8。

Q：在電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)中，瞬時(shí)基因表達(dá)的最佳孵育時(shí)間是多少？

A：最佳孵育時(shí)間為2-6天。這取決于各種因素，如蛋白質(zhì)在培養(yǎng)基中的穩(wěn)定性，蛋白質(zhì)的潛在毒性、細(xì)胞密度和質(zhì)粒在細(xì)胞核中的穩(wěn)定性。

可以在轉(zhuǎn)染后24、48、72和96小時(shí)取出等份樣品進(jìn)行摸索，測(cè)定蛋白質(zhì)表達(dá)。

Q：小鼠的年齡對(duì)小鼠T細(xì)胞轉(zhuǎn)染重要嗎？

A：我們建議使用6-12周的小鼠。從太年輕或太老的小鼠中分離的T細(xì)胞進(jìn)行核電轉(zhuǎn)都可能會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率和活率偏低。