碧云天的脂質氧化MDA檢測試劑盒（Lipid Peroxidation MDA Assay Kit）是一種用于測量脂質氧化水平的試劑盒。它采用一種基于MDA和硫代ba比妥酸（thiobarbituric acid, TBA）反應的顯色方法來產(chǎn)生紅色產(chǎn)物，然后通過比色法對血漿、血清、尿液、動植物組織或細胞裂解液中的MDA進行定量檢測。這種試劑盒被廣泛應用于脂質氧化水平的檢測。

MDA（丙二醛）是生物體脂質氧化的天然產(chǎn)物。當動物或植物細胞經(jīng)受氧化應激時，脂質氧化便發(fā)生。脂肪酸在氧化過程中會逐漸分解為一系列復雜的化合物，其中包括MDA。通過測量MDA的水平，我們可以了解脂質氧化的程度，因此MDA的測定被廣泛用作脂質氧化水平的指標。除了氧化應激反應外，生物體內的其他生化反應也會產(chǎn)生MDA，例如thromboxane synthase也能催化其產(chǎn)生，但只要在測定時設置適當?shù)膶φ?，就能觀察到脂質氧化水平的變化。

以碧云天的脂質氧化MDA檢測試劑盒（Lipid Peroxidation MDA Assay Kit）為工具，通過檢測MDA水平，可以準確評估生物體的脂質氧化程度。這種試劑盒符合脂質氧化水平檢測的需要，并且在科學研究和臨床應用中得到廣泛應用。

使用說明：

1. 樣品的準備：

a. 血漿、血清或尿液樣品制備后可以直接用于MDA測定。

b. 組織或細胞可以使用PBS裂解液進行勻漿或裂解。對于組織，組織重量占勻漿液或裂解液的比例為10%；對于細胞，每100萬細胞使用0.1ml裂解液或勻漿液。勻漿或裂解后，10,000g-12,000g離心10分鐘取上清用于后續(xù)測定。對于一些特殊樣品，離心不能獲得澄清的上清溶液的，可以使用0.2微米孔徑的過濾器過濾以獲得澄清的樣品溶液。勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或4℃進行操作。

2. 試劑盒的準備工作：

a. TBA儲存液的配制：稱取適量TBA，用TBA配制液配制成濃度為0.37%的TBA儲存液。例如18.5mg TBA用5ml TBA配制液配制，或者25mg TBA用6.76ml TBA配制液配制，最終濃度即為0.37%。TBA配制液需wan全溶解后再使用，可以加熱到70℃以促進溶解。TBA儲存液較難溶解，需加熱到70℃，并通過劇烈Vortex以促進溶解。配制好的TBA儲存液室溫避光保存，至少3個月內有效。

3. 樣品測定：

a. 在離心管或其它適當容器內加入0.1ml勻漿液、裂解液或PBS等適當溶液作為空白對照，加入0.1ml上述不同濃度標準品用于制作標準曲線，加入0.1ml樣品用于測定；隨后加入0.2ml MDA檢測工作液。

b. 混勻后，100℃或沸水浴加熱15分鐘。加熱時務必注意避免液體暴沸濺出。如果使用加熱塊(Heat block)進行加熱注意用重物壓緊離心管蓋；如果使用沸水浴，則需使用可把蓋子鎖死的離心管或螺旋蓋離心管，或用Parafilm封住離心管口，用針頭刺一小孔。zui方便和準確的加熱方法是使用帶有熱蓋并可以加熱0.5ml PCR管的PCR儀。

c. 水浴冷卻至室溫，1000g室溫離心10分鐘。取200微升上清加入到96孔板中，隨后用酶標儀在532nm測定吸光度。如果不方便測定532nm的吸光度，也可以測定530-540nm之間的吸光度?？梢栽O定450nm為參考波長進行雙波長測定。

d. MDA含量的計算：對于血漿、血清或尿液等樣品可以直接根據(jù)標準曲線計算獲得MDA的摩爾濃度，對于細胞、或組織樣品，計算出樣品溶液中的MDA含量后，可以通過單位重量的蛋白含量或組織重量等來表示最初樣品中的MDA含量，例如μmol/mg蛋白或μmol/mg組織。

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