限制性?xún)?nèi)切酶（restriction endonuclease，REases）是一種能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定位置切割DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類(lèi)酶，簡(jiǎn)稱(chēng)限制酶。下面讓我們一起來(lái)看看NEB限制性?xún)?nèi)切酶AlwI(R0513S)的產(chǎn)品介紹吧！

NEB限制性?xún)?nèi)切酶AlwI是一種可識(shí)別GGATCNNNN^N_ 序列的限制性?xún)?nèi)切酶，來(lái)源于大腸桿菌菌株，攜帶有克隆自洛菲不動(dòng)桿菌（Acinetobacter lwoffii）（R. Morgan）的 AlwI 基因。NEB酶AlwI 切割產(chǎn)生的 DNA 片段含有單堿基突出的 5′ 末端，它比平末端更難連接。該酶對(duì)dcm甲基化和CpG甲基化不敏感，dam 甲基化阻斷該酶酶切。對(duì)于不能熱失活的酶，NEB建議進(jìn)行柱純化，或脂糖凝膠電泳后切膠回收，或酚/氯仿抽提。

優(yōu)化限制性核酸內(nèi)切酶反應(yīng)：

在建立限制性核酸內(nèi)切酶消化物時(shí)，需要考慮幾個(gè)關(guān)鍵因素。在正確的反應(yīng)體積中使用適量的DNA、酶和緩沖液組分，可以達(dá)到最佳消化效果。根據(jù)定義，1 單位的限制性?xún)?nèi)切酶將在 60 分鐘內(nèi)在 50 μl 反應(yīng)中wan全消化 1 μg 底物 DNA。這種酶：DNA：反應(yīng)體積比可用作設(shè)計(jì)反應(yīng)的指南。然而，大多數(shù)研究人員遵循列出的“典型”反應(yīng)條件，建議過(guò)度消化 5-10 倍，以克服 DNA 來(lái)源、數(shù)量和純度的可變性。

產(chǎn)品選購(gòu)：