目前，研究人員們常通過靶點分析對癌癥靶點進行驗證，進而了解和控制其調(diào)控機制，以及在癌癥特征中所起的作用。自噬（Autophagy）是一種應(yīng)激誘導(dǎo)的保護機制，該機制在基礎(chǔ)條件下并不活躍，當(dāng)受到某些負面條件影響，如營養(yǎng)物質(zhì)耗盡和化學(xué)或遭受環(huán)境壓力時，真核細胞通過溶酶體介導(dǎo)的細胞內(nèi)容物的大量降解來利用該機制。

自噬活動的增加在癌癥、神經(jīng)變性疾病、心血管疾病和糖尿病等疾病的病理學(xué)研究中的作用，目前已經(jīng)得到廣泛認可和普遍研究。如果機體的溶酶體功能受到抑制，阻止了自噬小泡的去除，那么就可以通過增加的自噬小泡積聚量來體現(xiàn)自噬通量的誘導(dǎo)效果。

Enzo的熱銷產(chǎn)品CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0（貨號：ENZ-KIT175），使用了新型染料來檢測自噬小泡和監(jiān)控活細胞的自噬通量，選擇性標(biāo)記積累的自噬小泡。488 nm可激發(fā)的綠色染料已經(jīng)過了功能優(yōu)化，不染色溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現(xiàn)出明亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細胞轉(zhuǎn)染，可以在活細胞中監(jiān)控細胞自噬的快速定量方法。該試劑盒還包括用于核染色的Hoechst 33342染料、自噬誘導(dǎo)劑（Rapamycin）和溶酶體抑制劑（Chloroquine）。

作用機制：

CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0所用探針是一種陽離子兩親性示蹤劑（CAT）染料，它能以類似誘導(dǎo)磷脂藥物的方式迅速進入到細胞中，并選擇性標(biāo)記特定的功能分子。

在Enzo升級版的CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0試劑盒中，采用了優(yōu)化后的新型探針，不易在溶酶體中發(fā)生積聚的同時，還能夠?qū)εc自噬途徑相關(guān)的小泡進行特異性地標(biāo)記。

產(chǎn)品特點：

● 更明亮，更耐光，特異性地染色自噬小泡；

● 操作便捷，無需轉(zhuǎn)染；

● 反應(yīng)迅速，孵育時間只需30分鐘；

● 對自噬性溶酶體的染色效果微乎其微，可以忽略不計，大大降低了背景對染色效果呈現(xiàn)的干擾；

● 能夠快速量化原生異質(zhì)性細胞群中的自噬；

● 有助于高通量篩選自噬激活劑和抑制劑；

● 業(yè)界認可度高，產(chǎn)品的文獻引用率高。

產(chǎn)品實例：

Figure 1. 基于流式細胞儀的Jurkat細胞的自噬分析圖。Jurkat細胞不進行處理或分別用0.5µM雷帕霉素（RAP）、10µM氯喹（CLQ）或兩者同時處理20小時。用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2染色30分鐘后，清洗細胞，用流式細胞儀進行分析。結(jié)果以直方圖疊加的形式呈現(xiàn)，用RAP+CLQ共同處理的細胞熒光明顯增強。

Figure 2. HeLa細胞在(A)完-全培養(yǎng)基或(B)含有40 µM氯喹的饑餓培養(yǎng)基（EBSS）中培養(yǎng)4小時后，用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2進行染色。在含有氯喹的EBSS中的饑餓細胞顯示出非常明亮的綠色熒光信號和斑點狀結(jié)構(gòu)。

Figure 3. HepG2細胞自噬的微孔板分析。HepG2細胞在DMSO (control)、0.5 μM雷帕霉素(Rap)、10 μM氯喹(CLQ)或0.5 μM Rap+10 μM CLQ中培養(yǎng)20小時后，用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2進行染色。細胞用Hoechst 33342染色后進行細胞數(shù)歸一化，通過CYTO-ID® Green Detection Reagent 2檢測出Rap+CLQ處理組的細胞自噬增加。

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品最新引用文獻：

1. Amorfrutin B Protects Mouse Brain Neurons from Hypoxia/Ischemia by Inhibiting Apoptosis and Autophagy Processes Through Gene Methylation- and miRNA-Dependent Regulation: K. Przepiórska, et al.; Mol. Neurobiol. 60, 576 (2023), Abstract;

2. Brain injury accelerates the onset of a reversible agerelated microglial phenotype associated with inflammatory neurodegeneration: R.M. Ritzel, et al.; Sci. Adv. 9, eadd1101 (2023), Abstract;

3. CNS serotonin content mediating food deprivation-enhanced learning is regulated by hemolymph tryptophan concentration and autophagic flux in the pond snail: Y. Totani, et al.; Nutr. Neurosci. 26, 217 (2023), Abstract;

4. Effects of Sirolimus treatment on patients with β-Thalassemia: Lymphocyte immunophenotype and biological activity of memory CD4+ and CD8+ T cells: M. Zurlo, et al.; J. Cell. Mol. Med. 27, 353 (2023), Abstract;

5. Impaired Autophagy in Krabbe Disease: The Role of BCL2 and Beclin-1 Phosphorylation: N. Papini, et al.; Int. J. Mol. Sci. 23, 5984 (2023), Abstract;

6. Nanoparticles of folic acid-methyl-b-cyclodextrin (FA-MbCD)/adamantane-albumin exhibit enhanced antitumor activity compared with FA-MbCD alone: A. Sakai, et al.; FEBS Open Bio 13, 233 (2023), Abstract;

7. Novel hydroxamic acid derivative induces apoptosis and constrains autophagy in leukemic cells: M.A. Fischer, et al.; J. Adv. Res. (2023), Abstract;

8. Production and Characterization of K562 Cellular Clones Hyper-Expressing the Gene Encoding α-Globin: Preliminary Analysis of Biomarkers Associated with Autophagy: M. Zurlo, et al.; Genes 14, 556 (2023), Abstract;

9. Short peptide domains of the Wnt inhibitor sFRP4 target ovarian cancer stem cells by neutralizing the Wnt β-catenin pathway, disrupting the interaction between β-catenin and CD24 and suppressing autophagy: S.M. Sundaram, et al.; Life Sci. 16, 121384 (2023), Abstract;

10. Surface-Modified Inhaled Microparticle-Encapsulated Celastrol for Enhanced Efficacy in Malignant Pleural Mesothelioma: X. Wang, et al.; Int. J. Mol. Sci. 24, 5204 (2023), Abstract;

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