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為了復制、細菌需要特定的蛋白質合成過程，由核糖體蛋白質實現(xiàn)。紅霉素通過與易感細菌生物體核糖體 50S 亞基中的 23S 核糖體 RNA 分子結合來抑制蛋白質合成。它通過抑制蛋白質合成的轉肽/易位步驟和抑制 50S 核糖體亞基的組裝來阻止細菌蛋白質合成。這導致控制各種細菌感染。大環(huán)內(nèi)酯類（包括紅霉素）對細菌核糖體的強親和力支持其廣譜抗菌活性。大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是抑菌劑，通過可逆地結合敏感微生物的 50S 核糖體亞基，在結合氯霉素的位點處或附近，抑制蛋白質合成。紅霉素本身不抑制肽鍵形成，而是抑制易位步驟，其中新合成的肽基 tRNA 分子從核糖體上的受體位點移動到肽基供體位點。革蘭氏陽性菌積累的紅霉素比革蘭氏陰性菌多 100 倍。細胞對非離子形式的藥物的滲透性要強得多，這可能解釋了在堿性 pH 值下抗菌活性增加的原因。
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