FITC（異硫氰酸熒光素）能夠與各種抗體蛋白結(jié)合，同時不失去對特定抗原的特異性識別能力。一旦結(jié)合，抗體在堿性溶液中會表現(xiàn)出強(qiáng)烈的黃綠色熒光。通過在熒光顯微鏡下觀察或使用流式細(xì)胞儀分析，可以進(jìn)行對應(yīng)抗原的定性、定位或定量檢測。FITC在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)和獸醫(yī)學(xué)等多個領(lǐng)域被用于快速診斷由細(xì)菌、病毒、寄生蟲和其他病原體引起的疾病。

艾美捷異硫氰酸熒光素相關(guān)參數(shù)：

產(chǎn)品編號：B-CHM100

規(guī)格：100毫克

存儲條件：在避光的條件下，存放于-20°C。

分子式：C21H11NO5S

分子量：389.38

純度：高于或等于95%（通過高效液相色譜法測定）

光譜特性：激發(fā)/發(fā)射波長 = 490 / 525 納米

外觀：黃色粉末

運(yùn)輸與儲存

儲存條件：在避光的條件下，存放于-20°C。穩(wěn)定性：在適當(dāng)?shù)膬Υ鏃l件下，至少穩(wěn)定12個月。

異硫氰酸熒光素標(biāo)記抗體流程：

1. 將要進(jìn)行交聯(lián)的蛋白質(zhì)（濃度為1 mg/mL）在4°C下對交聯(lián)反應(yīng)緩沖液進(jìn)行三次透析，調(diào)整pH值至9.0。制備交聯(lián)緩沖液：將7.56克碳酸氫鈉、1.06克碳酸鈉和7.36克氯化鈉溶解在水中，最終體積為1升。

2. 將FITC在DMSO中溶解，濃度為1 mg/mL。為每次交聯(lián)反應(yīng)新鮮制備FITC溶液，并避免光照。

3. 以P:F（蛋白質(zhì)：FITC）= 1 mg:150 μg的比例，緩慢地將FITC加入抗體溶液中。在加入FITC時輕輕攪拌溶液，以確保與抗體均勻混合。在4°C的暗處進(jìn)行反應(yīng)8小時。

4. 加入5 mol/L的氯化銨至最終濃度為50 mmol/L，以在4°C下停止反應(yīng)2小時。

5. 將結(jié)合物對PBS溶液進(jìn)行至少四次透析，直到透析液變清。

6. 交聯(lián)材料的特征化：蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）= [A280 - 0.31 × A495] / 1.4；F/P比值：3.1 × A495 / [A280 - 0.31 × A495]。這個值應(yīng)該在2.5 ~ 6.5之間。

7. 將FITC蛋白結(jié)合物在pH 7.4的PBS中保存，添加0.1%的亞硝酸鈉和1%的牛血清白蛋白（BSA），在4°C的暗處保存。