在不斷發(fā)展的生物制藥和生命科學研究領域，尋找具有特性的新抗體至關重要。篩選不同動物物種的原代B細胞的能力將擴大回收抗體序列的多樣性，并能夠提升為治療、檢測試劑和基礎研究的不同應用找到最佳抗體的幾率。然而挖掘這些物種的抗體潛能一直具有挑戰(zhàn)性。在最新發(fā)布的應用說明中，我們概述了布魯克Beacon®單細胞光導系統(tǒng)和Opto® B Discovery產品組合如何提供一種快速篩選不同物種原代B細胞的新方法。

Opto® Memory B Discovery Workflow

Beacon®單細胞光導系統(tǒng)上的Opto® B Discovery 產品組合能夠在一周內對來自小鼠、人類和兔子原代樣品的B細胞進行功能篩選，從而快速選擇先導分子。將布魯克現(xiàn)有的 Beacon®單細胞光導系統(tǒng)與現(xiàn)已上市的Opto® Memory B Discovery試劑盒結合使用，可降低任何新物種的BCR全部成分的進入門檻，因為多種培養(yǎng)基配方已經過優(yōu)化，可支持不同動物的B細胞激活和存活，并且許多現(xiàn)成試劑可用于B細胞富集和篩選（圖1）。

圖1. Opto Memory B Discovery工作流程可在一周內快速分離和激活記憶B細胞、功能優(yōu)先的單B細胞篩選以及單克隆抗體序列的回收。

在不斷發(fā)展的生物制劑領域，找到具有特性的新抗體至關重要。在不同動物物種中篩選原代B細胞的能力擴大了回收的抗體序列的多樣性，并增加了在治療抗體、試劑抗體和基礎健康研究的多種應用領域找到最佳抗體的可能性。然而，挖掘這些物種的抗體潛力一直具有挑戰(zhàn)性。

Opto® Memory B Discovery樣品制備試劑盒能夠激活來自各種組織的記憶B細胞，包括新鮮外周血、整個器官（例如脾和淋巴結）和冷凍保存的PBMC，可實現(xiàn)人類和兔子記憶B細胞的穩(wěn)健、無飼養(yǎng)層激活（圖2），然后進行芯片上測定篩選和下游序列回收。提供了一種快速篩選不同物種的原代B細胞的新方法。

圖2. 從血液或脾臟樣本中分離記憶B細胞，用Opto® Memory B Discovery樣品制備試劑盒（人或兔）激活，以產生適合篩選的抗體分泌細胞

我們最新的應用說明深入探討了這些試劑盒的適用性，證明了它們與來自小鼠、大鼠、羊駝、雞、牛、山羊和綿羊組織的記憶B細胞的兼容性。通過系統(tǒng)實驗，我們成功激活并篩選了來自相容物種的B細胞，從而通過下一代測序回收目標抗體序列。我們還探索了記憶B細胞分離和激活的過程，展示了我們專有的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)基的效率和培養(yǎng)四小時后仍然能分泌IgG抗體的比例（圖3）。

圖3. 活化B細胞在芯片上加載4小時后繼續(xù)分泌IgG抗體的比例。

總體而言，我們證明人類和兔的Opto® Memory B Discovery試劑配方與小鼠、大鼠、羊駝、山羊和綿羊B細胞兼容，但是針對?；螂uB細胞的激活仍然需要優(yōu)化。利用Beacon®系統(tǒng)的高通量能力，我們分離并篩選了數(shù)千到上萬個單個B細胞，加速抗體發(fā)現(xiàn)過程。雖然有些物種的抗體發(fā)現(xiàn)流程仍然需要提升，我們的發(fā)現(xiàn)為進一步優(yōu)化奠定了基礎。

在這篇應用說明中除了為小鼠、人和兔單B細胞篩選提供優(yōu)化的端到端工作流程外，研究人員還可以輕松調整第三方試劑，以快速實現(xiàn)與其他技術仍無法實現(xiàn)的其他高價值物種庫的兼容性。擴大對廣泛物種序列多樣性的探索，使研究人員能夠撒下更大的網，以增加發(fā)現(xiàn)用于開發(fā)新型療法、診斷和試劑的抗體的機會。