產(chǎn)品名稱：索萊寶Solarbio小鼠脾臟淋巴細(xì)胞分離液試劑盒(P8860)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號(hào)：P8860

產(chǎn)品品牌：索萊寶

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品組成:

實(shí)驗(yàn)流程：

淋巴細(xì)胞分離方法（僅供參考）

1. 制備脾臟的單細(xì)胞懸液。

2. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，加入與脾臟單細(xì)胞懸液等量的分離液（分離液最少不得少于3 mL，總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果）。

3. 小心吸取單細(xì)胞懸液加于分離液液面上，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取單細(xì)胞懸液，然后小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。）

4. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~900g，離心20~30min。（根據(jù)脾臟單細(xì)胞懸液的量確定離心條件，單細(xì)胞懸液量越大，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件可以自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）。

5. 離心后，此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。第一層為稀釋液層；第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層；第三層為透明分離液層；第四層為紅細(xì)胞層。

6. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞至另一潔凈的 15mL離心管中，向離心管中加入10ml細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞，250g，離心10min。

7. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心 10min。

8. 重復(fù)步驟7

9. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。

脾臟單細(xì)胞懸液的制備方法（僅供參考）

脾臟研磨的方法：

1. 無(wú)菌條件下摘取脾臟，撕去脾臟被膜，用眼科剪將脾臟剪成小塊。

2. 將尼龍篩網(wǎng)或者是細(xì)胞過(guò)濾篩放置于平皿上，加入少量全血及組織稀釋液（保證脾臟及獲得的細(xì)胞處于液體環(huán)境中）。

3. 將脾臟放置于篩網(wǎng)上，使用注射器活塞或者是無(wú)菌鑷子來(lái)研磨脾臟（盡量控制研磨力度，保持篩網(wǎng)懸空，避免在皿底上直接研磨而造成大批細(xì)胞死亡）

4. 研磨后使用全血及組織稀釋液沖洗篩網(wǎng)，收集細(xì)胞懸液，再經(jīng)濾網(wǎng)過(guò)濾。

相關(guān)文獻(xiàn)：

[1] Yuying Liu,Xiaoyu Liang,Wenqian Dong,et al. Tumor-Repopulating Cells Induce PD-1 Expression in CD8+ T Cells by Transferring Kynurenine and AhR Activation. Cancer cell. March 2018. (IF 23.916)

[2] Qiushuang Zhang,Chao Xie,Dongyu Wang,et al. Improved Antitumor Efficacy of Combined Vaccine Based on the Induced HUVECs and DC-CT26 Against Colorectal Carcinoma. Cells. May 2019. (IF 5.656)

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