大家好！這篇文章是關(guān)于原代培養(yǎng)的入門知識(shí)，向剛?cè)腴T的同學(xué)科普這個(gè)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。

包括以下內(nèi)容：

1. 原代培養(yǎng)的概念和流程

2. 分離組織的操作和注意事項(xiàng)

3. 解離組織獲取細(xì)胞的三種常見(jiàn)方法

原代培養(yǎng)是指細(xì)胞分離之后至第一次傳代之前的細(xì)胞培養(yǎng)階段，之后細(xì)胞就轉(zhuǎn)變成細(xì)胞系。

原代培養(yǎng)可分為4個(gè)步驟：

1. 獲取樣品
   

2. 分離組織

3. 解剖或解離組織

4. 接種于培養(yǎng)皿中培養(yǎng)

用于原代培養(yǎng)的樣品中可來(lái)源于2類，一是實(shí)驗(yàn)室樣本，包括實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的器官、組織，例如胚胎、腸道等；二是臨床樣本，例如通過(guò)手術(shù)過(guò)程分離出來(lái)的病人組織。

分離組織

1. 在取材時(shí)可以盡量多去除脂肪和壞死的組織。
2. 使用鋒利的手術(shù)刀將組織切碎，以減小對(duì)組織的損傷

獲取細(xì)胞

獲取組織之后，我們要把細(xì)胞從組織中分離出來(lái)繼續(xù)生長(zhǎng)，這個(gè)操作可分為兩種:

1.將組織塊貼附于適宜的基質(zhì)中，細(xì)胞可從組織塊向外遷移生長(zhǎng)，這個(gè)操作過(guò)程叫原代外植;

2.將組織塊用機(jī)械法或酶消化法處理獲得細(xì)胞懸液，接種細(xì)胞懸液，其中部分細(xì)胞最終將黏附于基質(zhì)開(kāi)始生長(zhǎng)。

如果所取組織很小，則適于用原代外植法；如果組織較大，可用酶消化法以獲得更多的細(xì)胞。

軟的組織適合于用機(jī)械法解離，一些硬的組織，如果產(chǎn)物的多少并不重要，或者從纖維間質(zhì)組

織分離松散黏附的細(xì)胞，也可用機(jī)械法分離。

胰蛋白酶處理

酶處理方法主要分為胰蛋白酶和膠原酶處理，而胰蛋白酶的反應(yīng)條件來(lái)劃分又可以分為冷胰蛋白酶和溫胰蛋白酶兩種。

• 切碎或“溢出”，切割作用或被切表面的破損使細(xì)胞釋放出來(lái)
• 篩網(wǎng)擠壓，用注射器芯將組織擠壓過(guò)篩網(wǎng)
• 注射器吸打，將組織吸入注射器中，通過(guò)-個(gè)大孔徑的針頭或?qū)Ч軐⒁后w快速打出
• 用吸管打碎，用大孔徑的吸管吸取組織塊上下吹打

2 不同種類的細(xì)胞應(yīng)采用相應(yīng)的解離方法，例如，胰蛋白酶比膠原酶作用強(qiáng)，建立單細(xì)胞懸液更高效；膠原酶不能解離上皮細(xì)胞，但這一特性成為它的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，可利用它使上皮細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞分離并保持上皮細(xì)胞團(tuán)的活力。機(jī)械法比酶消化法快，但對(duì)細(xì)胞損傷大。

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