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ELISA法的免疫反應(yīng)部分中，抗原-抗體的親和力、抗原和半抗原的性質(zhì)、測定方法的實(shí)驗(yàn)條件、酶標(biāo)記物的性質(zhì)等因素均會影響反應(yīng)的敏感性。在酶學(xué)反應(yīng)部分中，酶的濃度、底物的濃度、反應(yīng)pH、溫度、酶的抑制劑和激活劑等因素也影響反應(yīng)的敏感性。下面讓我們一起來看看ELISA實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)吧！
需要注意以下幾點(diǎn)：
(1)待測樣品溶液中不能存在與標(biāo)記酶相同的酶、底物、酶抑制劑和其他干擾因素，以防止干擾作用。
(2)聚苯乙烯反應(yīng)板測定時(shí)，溶液宜垂直滴入凹孔中間，相繼加入的溶液都覆蓋相同的載體表面積。在吸附、溫育和洗滌等操作中應(yīng)避免劇烈震搖、攪拌等，以保證恒定的吸附容量。在洗滌操作中，由于聚苯乙烯反應(yīng)板凹孔容量小、孔間距離近，故洗滌時(shí)要注意每次加入的洗滌液量既要達(dá)到洗滌充分又要避免相鄰孔內(nèi)液體互相污染。
(3)在ELISA中血清陰性對照的顯色反應(yīng)常常是因酶結(jié)合物與固相之間的非特異性吸附所致，可在酶結(jié)合物稀釋時(shí)中加入去污劑(如Tween-20)或非特異性蛋白質(zhì)(牛血清白蛋白)，減少酶結(jié)合物的非特異性吸附作用。稀釋的酶結(jié)合物置于室溫條件下過久，會影響底物的顯色反應(yīng)，所以酶結(jié)合物應(yīng)在使用前稀釋。
(4)一些底物如OPD和TMB在暗處穩(wěn)定，底物溶液要現(xiàn)用現(xiàn)配，酶促反應(yīng)時(shí)注意避光。某些含苯環(huán)的底物有致畸變作用或致癌作用，使用時(shí)要多加小心，測定完數(shù)據(jù)后，收集反應(yīng)溶液，集中處理，不要流入下水道。
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