傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染技術無法有效轉(zhuǎn)染許多常用于細胞療法的細胞類型，如原代T細胞。而電穿孔是一種強大的轉(zhuǎn)染工具，它利用電脈沖瞬時增加細胞膜的通透性，使裸物質(zhì)（如DNA/RNA、蛋白質(zhì)等）短時大量進入細胞完成載體遞送，以更低成本、更靈活高效和更安全可持續(xù)的優(yōu)勢，成為非病毒載體轉(zhuǎn)染中前景的新興技術之一。

然而你真的了解電穿孔技術嗎

RegMedNet所推出的電穿孔工具書中邀請到了Arsenal Biosciences的聯(lián)合創(chuàng)始人Theodore Roth和Lonza細胞工程研發(fā)主管Ludger Altrogge，重點回答了六道精華問題。

Theodore Roth

Arsenal Biosciences

聯(lián)合創(chuàng)始人

Ludger Altrogge

Lonza細胞工程研發(fā)主管

Interview

超越障礙：

關于非病毒轉(zhuǎn)染的訪談

Q1

Ludger, 電穿孔等非病毒方法在基因修飾方面的優(yōu)勢在哪里？

非病毒方法在使用的貨物/底物類型方面具有靈活性。例如，它不能只傳遞核酸(DNA、mRNA)，也不能傳遞蛋白質(zhì)，如用于CRISPR基因編輯的Cas9 RNPs。非病毒方法既適用于治療基因的瞬時表達，也適用于細胞的穩(wěn)定遺傳工程。前者可以通過通過傳遞mRNA或DNA（質(zhì)粒、而轉(zhuǎn)座酶系統(tǒng)（如睡美人或 PiggyBac）以及用于定向整合的工程化核酸酶（如CRISPR）可實現(xiàn)穩(wěn)定的細胞基因工程。基于病毒和轉(zhuǎn)座酶的改造通常更有效，但由于整合在基因組中隨機發(fā)生，因此可控性較差。將工程化的核酸酶作為重組的RNPs運送，可以更好地控制修飾的劑量。

Q2

Theo，你是如何在實驗室中使用電穿孔技術的？

Q3

Ludger，你能詳細介紹一下龍沙提供的非病毒基因轉(zhuǎn)移技術嗎？

Q4

Theo，在你看來，使用Nucleofector™技術進行CRISPR/Cas9介導的基因組編輯有哪些優(yōu)勢？

Q5

Theo，你們也進行 CRISPR 篩選嗎？

Q6

Theo，您認為核轉(zhuǎn)染技術在治療方法和藥物開發(fā)中的應用前景如何？

除此之外，更有以下內(nèi)容免費分享給大家。

Review：對間充質(zhì)干細胞進行改造以增強骨靶向性和骨再生能力

Poster：誘導性Cas9 T細胞：異體CAR-T細胞生成的創(chuàng)新平臺

Research article：用于體內(nèi)應用的人CD34+祖細胞的高效瞬時基因標記

Poster：原代人類肝細胞的高效轉(zhuǎn)染和長期持續(xù)功能性

Review：CRISPR介導的DNA甲基化模式修飾在癌癥治療新時代的應用

Benchmark：通過流式細胞術和桑格測序評估CRISPR/Cas9介導的CD19基因敲除GM24385細胞的方案