磷酸化蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：15231

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒用于哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取胞質(zhì)蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為強(qiáng)烈，可獲得總蛋白，可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。

產(chǎn)品組成：

操作步驟：

在1mL的冷裂解液中各加入10µL的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；

1. 組織總蛋白的提取

1) 稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1mL 的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個(gè)過程注意冰上操作；

2) 將組織勻漿液移入1.5mL的EP管中，4℃12000g離心30min；

3) 吸取上清至新的管中；

4) 進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。

（提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時(shí)間儲(chǔ)存。）

2. 細(xì)胞總蛋白的提取

1) 裂解液的用量：10⁷個(gè)細(xì)胞需要裂解液1mL；

2) 貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min。

3) 懸浮細(xì)胞：4℃400g 離心收集細(xì)胞，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次；

4) 裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4℃12000g離心30min；

5) 將上清移入新的EP管中；進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。

（提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時(shí)間儲(chǔ)存。）

注意事項(xiàng)：

1. 實(shí)驗(yàn)過程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境。

2. PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)?/span>PMSF在水溶液中會(huì)快速降解。

有效期：12個(gè)月有效。