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菌落計(jì)數(shù)與面積測量的高效化

來源:基恩士(中國)有限公司   2024年07月29日 09:39  


菌落計(jì)數(shù)與面積測量

為確保產(chǎn)品安全性而實(shí)施的微生物檢查或遺傳毒性試驗(yàn)。在微生物檢查中,對培養(yǎng)基上活菌菌落數(shù)量的經(jīng)時(shí)變化進(jìn)行計(jì)數(shù),以計(jì)算菌數(shù)量的形式并進(jìn)行微生物評價(jià)。另外,在作為一種遺傳毒性試驗(yàn)的Ames試驗(yàn)(艾姆斯試驗(yàn))中,向原本無法自己產(chǎn)生氨基酸的菌株投入試驗(yàn)物質(zhì),根據(jù)其中形成的菌落及其比重來評價(jià)誘發(fā)突變性。
在此類實(shí)驗(yàn)中,需要對隨著時(shí)間變化而在培養(yǎng)板上增殖,變化的活細(xì)胞或菌落進(jìn)行區(qū)分測量,如果憑借測量人員的目視測量計(jì)數(shù),容易產(chǎn)生數(shù)值的偏差或人為誤差,影響對該培養(yǎng)板的準(zhǔn)確評價(jià)。以高倍率觀察培養(yǎng)板或計(jì)數(shù)并評價(jià)形成的菌落時(shí),由于視野變窄無法快速觀察培養(yǎng)板整體的情況,需要花費(fèi)大量時(shí)間逐一視野查看計(jì)數(shù)。而且還有很大的風(fēng)險(xiǎn)漏看錯(cuò)看。

另外,在再生醫(yī)療研究領(lǐng)域,觀察培養(yǎng)板整體并準(zhǔn)確分析iPS細(xì)胞菌落數(shù)量是評價(jià)該實(shí)驗(yàn)的重要方法。并且,在以改善培養(yǎng)工序以及提高培養(yǎng)效率為目的的實(shí)驗(yàn)中,需要大量進(jìn)行針對不同條件、培養(yǎng)基種類以及傳代方法等對比試驗(yàn)。
但是,在菌落計(jì)數(shù)或測量中,因各工作人員手動(dòng)計(jì)數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)以及方法不同造成的結(jié)果的偏差和人為誤差,會(huì)影響統(tǒng)計(jì)結(jié)果的準(zhǔn)確性。尤其是iPS細(xì)胞在培養(yǎng)過程中形成菌落的同時(shí)細(xì)胞也在自我增殖,菌落內(nèi)的細(xì)胞形態(tài)會(huì)發(fā)生變化。因此,細(xì)胞間的界限可能難以判斷,更增大了目視計(jì)數(shù)的難度進(jìn)而影響評價(jià)的準(zhǔn)確性。

在發(fā)生手動(dòng)計(jì)數(shù)錯(cuò)誤或自動(dòng)計(jì)數(shù)時(shí)發(fā)生誤檢時(shí),需要花費(fèi)大量時(shí)間和經(jīng)費(fèi)重新開啟實(shí)驗(yàn)。在各種檢查或測試、實(shí)驗(yàn)等中,在人數(shù)有限的情況下消除勞力與時(shí)間上的浪費(fèi),并取得更多成果,必須同時(shí)提高數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性與工作效率。

解決菌落計(jì)數(shù)與面積測量的案例

基恩士的一體化熒光顯微成像系統(tǒng)BZ-X800,僅需1臺即可以多功能支持熒光、相位差、明視場觀察及各種拍攝方法。還可實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)板的整體觀察、定量菌落計(jì)數(shù)及面積測量等,解決實(shí)驗(yàn)、研究或試驗(yàn)、檢查中的諸多課題。
結(jié)合使用電動(dòng)載物臺的全自動(dòng)圖像拼接模塊來觀察培養(yǎng)板整體,以及對iPS細(xì)胞培養(yǎng)板的整體圖像進(jìn)行菌落分析的案例,介紹導(dǎo)入BZ-X800的優(yōu)點(diǎn)。

使用大型電動(dòng)載物臺進(jìn)行的培養(yǎng)板整體觀察

使用顯微鏡在高倍率下觀察菌落時(shí),由于視野變窄,必須一邊保存載物臺坐標(biāo)逐一移動(dòng)視野觀察局部圖像。因此,無法將培養(yǎng)板整體納入一個(gè)視野內(nèi)的同時(shí)以高倍率觀察微小菌落。也可將高倍率拍攝的圖像經(jīng)過圖像處理拼接成1張圖像,以獲得大視野圖像,但通過手動(dòng)操作進(jìn)行拼接作業(yè)不僅難度高,還需花費(fèi)大量時(shí)間。綜上所述,如何在經(jīng)時(shí)變化的活細(xì)胞或活菌不產(chǎn)生影響的情況下,快速觀察培養(yǎng)板整體尤為重要。

BZ-X800搭載大型電動(dòng)載物臺,可按照程序在X、Y、Z軸方向上自動(dòng)移動(dòng)的同時(shí),在高倍率下連續(xù)拍攝圖像,并自動(dòng)進(jìn)行圖像拼接,可輕松獲取培養(yǎng)板整體的高分辨率圖像。即可觀察培養(yǎng)板整體的大視野圖像,也可觀察高倍率下菌落的形態(tài),在不遺漏且不會(huì)遺失觀察坐標(biāo)的情況下進(jìn)行觀察。
另外,可對多孔培養(yǎng)板中的多個(gè)孔自動(dòng)執(zhí)行批量圖像拼接。

培養(yǎng)板整體中iPS細(xì)胞菌落計(jì)數(shù)與面積測量的高效化案例

活細(xì)胞或活菌的經(jīng)時(shí)變化影響到對培養(yǎng)板內(nèi)的分析結(jié)果與評價(jià),因此重要的是快速獲得定量分析結(jié)果。
以下圖像是對使用BZ-X800的圖像拼接獲得的iPS細(xì)胞培養(yǎng)板單孔圖像,使用“混合細(xì)胞計(jì)數(shù)”自動(dòng)實(shí)施菌落計(jì)數(shù)及面積測量的案例。通過大視野觀察對培養(yǎng)板整體中菌落的數(shù)量及面積的平均、標(biāo)準(zhǔn)偏差、總數(shù)值進(jìn)行定量測量,可快速獲得分析結(jié)果。由此,得以消除手動(dòng)計(jì)數(shù)所需的大量時(shí)間與勞力,以及發(fā)生人為誤差的風(fēng)險(xiǎn)。

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使用多孔培養(yǎng)板時(shí),通過使用BZ-X800的“宏細(xì)胞計(jì)數(shù)”,可以以其中1張圖像的分析條件作為模板,在同一條件下批量自動(dòng)測量其他的多張圖像。
采用人工計(jì)數(shù)對多個(gè)孔的菌落進(jìn)行分析,不僅花費(fèi)大量的時(shí)間與精力,還因不同的測量人員因操作方法不一而發(fā)生分析結(jié)果及評價(jià)上的偏差,BZ-X800則可在短時(shí)間內(nèi)輕松實(shí)現(xiàn)定量測量與評價(jià)。

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如果引進(jìn)一體化熒光顯微成像系統(tǒng)BZ-X800


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