外泌體是由活細胞分泌的，包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)，直徑在30-150nm的具有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡，現(xiàn)在特指直徑40-100nm的盤狀囊泡，主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁等。

外泌體富含膽固醇和鞘磷脂，并攜帶有DNA、mRNA、microRNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及一些代謝物，目前已經(jīng)通過286項研究發(fā)現(xiàn)了41860種蛋白質(zhì)、2838種microRNA、3408種mRNA。

外泌體功能

1）介導信號轉(zhuǎn)導和分子轉(zhuǎn)移。作為多重信號顆粒，每個外泌體都有能力通過細胞表面同源受體的參與和聚集來傳遞多重組合信號，并且這種活性已被證明適用于參與生長因子、細胞因子、Wnt和Notch途徑的蛋白質(zhì)。此外，外泌體與靶細胞的融合具有將功能受體傳遞給靶細胞的能力，在某些情況下甚至激活受體和效應(yīng)物；

2）人類的生殖、懷孕和胚胎發(fā)育需要精確、精細和動態(tài)的細胞間通信。母乳來源的外泌體具有調(diào)節(jié)胎兒免疫系統(tǒng)的功能。在母乳中，外泌體不僅促進產(chǎn)后胎兒健康和生長，母乳來源的外泌體含有具備免疫相關(guān)功能的miRNA，并在體外增加外周血來源的T調(diào)節(jié)細胞的數(shù)量，可能調(diào)節(jié)免疫耐受；
3）調(diào)節(jié)免疫。外泌體的供體細胞來源多種多樣，如樹突狀細胞、抗原遞呈細胞甚至免疫細胞本身，且同一種細胞細胞在不同生理環(huán)境下分泌的外泌體功能不同，可促進免疫應(yīng)答，也可免疫抑制；

4）外泌體與疾病。外泌體可能在代謝性疾病的出現(xiàn)以及心血管健康中發(fā)揮作用，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它們可以轉(zhuǎn)移代謝產(chǎn)物，并通過小鼠和人類的胰腺b細胞、脂肪組織、骨骼肌和肝臟之間的外泌體miRNA交換促進細胞間通訊；外泌體可以參與錯誤折疊蛋白質(zhì)的清除，從而發(fā)揮解毒和神經(jīng)保護功能，進而在退行性疾病中發(fā)揮作用；與外泌體在其他疾病中的作用的研究相比，外泌體對癌癥的研究進展迅速，外泌體影響腫瘤形成、腫瘤生長和轉(zhuǎn)移、副腫瘤綜合征和對治療的耐藥性。

外泌體臨床應(yīng)用

1）疾病診斷。外泌體存在于所有生物液體中，由所有細胞分泌，使其作為微創(chuàng)液體活檢具有吸引力，并有可能進行縱向采樣以跟蹤疾病進展。外泌體診斷應(yīng)用的焦點疾病包括心血管疾病、影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的疾病和癌癥；

2）載體制備。與脂質(zhì)體相反，外泌體具有良好的耐受性，在小鼠外源性給藥時可以以最小的免疫清除率遞送功能性藥物；

3）治療作用。間充質(zhì)干細胞衍生的外泌體可以發(fā)揮治療作用，并且在治療移植物抗宿主疾病患者中的應(yīng)用表明，重復(fù)注射具有良好的耐受性，不會產(chǎn)生顯著的副作用。

外泌體研究中的樣本制備

外泌體研究中的樣本涉及血液、尿液、乳汁、唾液、腦脊液及細胞培養(yǎng)上清，整體的原則是去除細胞、新鮮樣本、低溫保存(-80℃)。

注意事項：

1）在收獲細胞時，盡量保證死細胞數(shù)量不超過5%，因為凋亡、死亡的細胞會分泌凋亡小體，從而對活細胞產(chǎn)生的外泌體造成污染；

2）如果后期要將提取的外泌體進行共孵育或者動物實驗，需要用2um的濾器對外泌體進行除菌；
3）細胞上清樣品越早處理越好，長時間放置，含有的細胞破裂，胞內(nèi)囊泡釋放也會對活細胞產(chǎn)生的外泌體產(chǎn)生污染；
4）不能用DMEM、1640、F12這些基礎(chǔ)培養(yǎng)基替代血清或者外泌體專用無血清培養(yǎng)基呢，細胞在這些基礎(chǔ)培養(yǎng)基的環(huán)境下，是處于饑餓狀態(tài)的，細胞會將培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)全部消耗掉的，這時的上清液中的外泌體含量會大幅度下降。