ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,酶聯(lián)免疫吸附試驗)是一種常用的實驗技術,用于檢測和定量分析樣品中特定抗原或抗體的存在。ELISA是基于免疫學原理的一種高靈敏度和高特異性的實驗方法。下面讓我們一起來看看ELISA實驗操作方法吧!
ELISA實驗通常包括以下步驟:
1. 涂覆:將待檢測的抗原或抗體溶液加入到微孔板(通常是96孔板)中,并在孔板表面上形成一層固定的抗原或抗體。這個過程被稱為涂覆。
2. 阻斷:為了防止非特異性結合,需要在涂覆后加入一種阻斷劑,例如牛血清蛋白(BSA)或牛奶粉,以覆蓋孔板上未被固定的表面。阻斷劑可以減少非特異性結合和降低背景信號。
3. 樣品加入:將待測樣品加入到微孔板中,樣品中的目標抗原或抗體與固定在孔板上的抗體或抗原相互作用。
4. 洗滌:通過反復洗滌孔板,去除未結合的物質,以減少背景信號。
5. 探針加入:加入與待測物體特異性結合的酶標記二抗(例如辣根過氧化物酶-HRP)或酶標記抗原,使其與樣品中的目標物體結合。
6. 洗滌:再次洗滌孔板,去除未結合的酶標記物。
7. 底物加入:加入一種底物,其與酶標記物相互作用,產生可測量的信號。常用的底物是一種可被酶催化產生顏色或熒光的物質。
8. 反應停止:通過加入一種停止劑,停止底物的反應,阻止信號進一步增加。
9. 信號測量:使用光譜儀或熒光測量儀測量底物反應產生的信號,根據信號的強度來確定樣品中目標物體的濃度。
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