AAV2滴度檢測試劑盒/AAV2 Titration ELISA PRATV原理：

該測定基于夾心ELISA技術(shù)，其中針對組裝好的AAV衣殼上的構(gòu)象表位的單克隆抗體（mab）被包被在板上，并用于從樣本中捕獲AAV顆粒。

捕獲的AAV顆粒的檢測是一個兩步過程。

生物素偶聯(lián)的mab與捕獲的AAV顆粒結(jié)合。

鏈霉親和素過氧化物酶結(jié)合物與生物素分子反應(yīng)。加入底物后會產(chǎn)生顏色反應(yīng)，其與特定結(jié)合的病毒顆粒的數(shù)量成正比。

AAV定量方法比較：

每種常用的定量方法都有其優(yōu)缺點：

qPCR廣泛使用，但存在樣本制備、引物設(shè)計或PCR效率等問題，可能導致實驗室間結(jié)果變異性高。

數(shù)字滴液PCR方法克服了qPCR的一些限制。然而，由于不同的樣本處理協(xié)議，實驗室間仍然可能發(fā)生變異。

點印跡是一種簡單且定量的方法，如果使用了可靠的參考材料。然而，它受到一般西方印跡線性和動態(tài)范圍有限的影響。

鑒于上述技術(shù)的實用缺陷，傳統(tǒng)的夾心ELISA在實驗室間和實驗室內(nèi)變異性以及易用性方面目前似乎更優(yōu)。因此，它代表了可靠和可重復定量總rAAV衣殼滴度的最佳格式。

使用混合/突變型AAV：

對混合/突變型AAV載體的識別取決于受混合/突變影響的特定衣殼區(qū)域。PROGEN的AAV ELISA中使用的捕獲抗體結(jié)合特定的，某些情況下是明確定義的構(gòu)象表位。這些表位是由相應(yīng)AAV血清型的衣殼組裝產(chǎn)生的。ELISA可能識別您的混合/突變型AAV載體的第一個跡象是抗體結(jié)合表位的存在。然而，衣殼蛋白的蛋白質(zhì)序列變化也可能影響蛋白質(zhì)的構(gòu)象，因此也影響AAV衣殼上呈現(xiàn)的表位的構(gòu)象。這可能會影響抗體的結(jié)合親和力，并影響基于AAV ELISA試劑盒提供的（非混合）試劑盒對照的滴度測定。由于這些特性在很大程度上取決于所執(zhí)行的特定混合/突變，PROGEN無法保證成功且精確地定量您的混合/突變型AAV載體。即使抗體結(jié)合表位仍然存在于您的混合/突變型AAV衣殼上，您的測定也需要針對您的特定AAV載體進行測試和優(yōu)化。

PROGEN強烈建議生產(chǎn)和校準一個合適的（混合/突變型）試劑盒對照，以確保使用PROGEN ELISA試劑盒可靠地測定您個別混合/突變型AAV載體的滴度。

艾美捷AAV2滴度檢測試劑盒：

AAV2 Titration ELISA PRATV

貨號 PRO-PRATV

數(shù)量 96次測試

反應(yīng)性 AAV2

儲存 2-8°C

用途 僅供研究使用

應(yīng)用 ELISA

產(chǎn)品描述 d特的微孔板酶聯(lián)免疫測定，用于定量AAV2的病毒顆粒和組裝的空衣殼。捕獲抗體檢測的構(gòu)象表位不存在于未組裝的衣殼蛋白上。

試劑盒對照/標準 AAV2的空衣殼制劑

形式提供 試劑盒，12 x 8孔條狀包裝

AAV2滴度檢測試劑盒/AAV2 Titration ELISA PRATV特點：

AAV2衣殼定量ELISA

完整和空AAV2衣殼的檢測

A20抗體用作捕獲和檢測抗體

AAV2滴度檢測試劑盒/AAV2 Titration ELISA PRATV文獻參考：

Hamann, M. V. et al. Improved targeting of human CD4+ T cells by nanobody-modified AAV2 gene therapy vectors. PLoS One 16, (2021).

Satkunanathan, S., Thorpe, R. & Zhao, Y. The function of DNA binding protein nucleophosmin in AAV replication. Virology 510, 46–54 (2017).

Lock M, McGorray S, et al. Characterization of a recombinant Adeno-Associated Virus Type 2 reference standard material; Hum Gene Therapy 21:1273-1285 (2010).

Lochrie, M. A. et al. Mutations on the External Surfaces of Adeno-AssociatedVirus Type 2 Capsids That Affect Transduction andNeutralization. J. Virol. 80, 821–834 (2006).