COX1（環(huán)氧合酶1），也稱為前列腺素內(nèi)過氧化物合酶1（PTGS），是一種過氧化物酶，通過將花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素H2參與前列腺素的形成。COX1在大多數(shù)細(xì)胞中恒定表達(dá)，并參與組織穩(wěn)態(tài)。COX-1通過增加粘液和碳酸氫鹽的形成，減少酸和胃蛋白酶的分泌，并保持適當(dāng)?shù)难鳎龠M(jìn)胃粘膜的細(xì)胞保護(hù)。它參與血小板中血栓素A2（TxA2）的形成，這刺激了聚集和血管收縮。COX1和COX2在523位點(diǎn)不同，COX2有一個纈氨酸，而COX1有一個異亮氨酸殘基，這使得開發(fā)特定抑制劑成為一個挑戰(zhàn)。使用COX抑制劑或NSAIDs（非甾體抗炎藥）是常見的用于管理疼痛和炎癥的方法。傳統(tǒng)的NSAIDs，如阿司匹林和布洛芬，可能導(dǎo)致消化系統(tǒng)的損害。使用低劑量阿司匹林可以幫助預(yù)防動脈血栓形成，發(fā)現(xiàn)其他能夠抑制COX1的化合物可能證明在心血管疾病治療中作為輔助藥物是有益的。

COX1抑制劑篩查試劑盒旨在測量COX1（環(huán)氧化酶1）活性，用于篩查和分析應(yīng)用。該檢測試劑盒采用方便的96孔格式，含有足夠的純化重組COX1、Amplex™Red、花生四烯酸稀釋劑、COX檢測緩沖液和100%乙醇，可用于100種酶反應(yīng)。

艾美捷COX1抑制劑篩選檢測試劑盒：

貨號：BPS-82203

測定試劑盒格式：熒光生成

物種：人類

需要但不提供的物料：

花生四烯酸（Cayman Chemical #90010.1）

可調(diào)微量移液器和無菌吸頭

能夠在λex535/λem590 nm下測量的熒光板讀數(shù)器

儲存/穩(wěn)定性：

如果按照指示儲存材料，這個測定試劑盒在收到日期后的6個月內(nèi)將表現(xiàn)最佳。

應(yīng)用：研究酶動力學(xué)，篩選小分子抑制劑，用于藥物發(fā)現(xiàn)和高通量篩選應(yīng)用。

運(yùn)輸溫度：-80°C

科學(xué)類別：代謝酶

僅供研究使用

COX1抑制劑篩選檢測試劑盒測定協(xié)議：

• 所有樣本和對照應(yīng)以雙份進(jìn)行。

• 測定應(yīng)包括“陰性對照”、“陽性對照”和“試驗(yàn)抑制劑”條件。

• 建議使用時將稀釋后的蛋白質(zhì)保持在冰上。

• 有關(guān)蛋白質(zhì)處理的詳細(xì)信息，請參閱蛋白質(zhì)常見問題解答。

• 推薦使用Valdecoxib作為內(nèi)部對照。如果不對控制抑制劑進(jìn)行劑量反應(yīng)曲線測定，建議以0.1倍、1倍和10倍IC50值運(yùn)行控制抑制劑，IC50值如下所示。

1. 將COX測定緩沖液和Amplex™ Red解凍。

2. 在冰上解凍COX1。輕輕旋轉(zhuǎn)管子以回收其全部內(nèi)容物。

3. 用COX測定緩沖液將COX1稀釋至35 ng/µl（每個孔需要20 µl）。

4. 將稀釋后的COX1 20 µl添加到所有孔中，除了“陰性對照”孔。

5. 向“陰性對照”孔中添加70 µl的COX測定緩沖液。

6. 準(zhǔn)備試驗(yàn)抑制劑（每個孔10 µl）：對于滴定，準(zhǔn)備比期望的最終濃度高10倍的連續(xù)稀釋。反應(yīng)的最終體積為100 µl。

6.1. 如果試驗(yàn)抑制劑是水溶性的，在COX測定緩沖液中準(zhǔn)備比期望的最終濃度高10倍的連續(xù)稀釋。對于陽性和陰性對照，使用COX測定緩沖液（稀釋液）。

7. 將10 µl試驗(yàn)抑制劑添加到z定的“試驗(yàn)抑制劑”孔中。

8. 將10 µl稀釋液添加到“陽性對照”和“陰性對照”孔中。

9. 將Amplex™ Red用蒸餾水稀釋10倍。

10. 向所有孔中添加10 µl稀釋后的Amplex™ Red。

11. 在玻璃瓶中準(zhǔn)備花生四烯酸（未提供），12. 向所有孔中添加10 µl 0.5 mM花生四烯酸。

13. 立即在熒光讀數(shù)器中讀取樣品的熒光強(qiáng)度（激發(fā)波長 = 535 nm；發(fā)射波長 = 590 nm）。

COX1抑制劑篩選檢測試劑盒示例結(jié)果：

在濃度增加的SC-560（Tocris#1550）存在下測量COX1活性

COX1抑制劑篩選檢測試劑盒文獻(xiàn)參考：

Zaragoza C., et al., 2022 Molecules 27(3):1146.

Bruno A., et al., 2023 Adv Pharmacol 97:133-165.

相關(guān)產(chǎn)品：

COX2, FLAG-His-Tags Recombinant    71111   100 µg

COX2 Inhibitor Screening Assay Kit     82210    96 reactions

GDF15:GFRAL[Biotinylated] Inhibitor Screening Assay Kit    78807   96 reactions