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植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒

來源:上海滬峰生物科技有限公司   2012年04月20日 10:55  

植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理:

用純化的赤霉素抗體包被微孔板,制成固相載體,往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的赤霉素抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的赤霉素呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37溶解;試劑或樣品配制時(shí),均需充分混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?100 ,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100,注意不要有氣泡,加樣 時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效
性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100(臨用前配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37溫育1小時(shí)。
3、 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4、 每孔加檢測(cè)溶液
5、 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液90,酶標(biāo)板加上覆膜37避光顯色(反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯時(shí),即可終止)。
7、 每孔加終止溶液50,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物    液的加入順序相同。
8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(值)。
ELISA試劑盒樣本要求:

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因?yàn)榀B氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。

注意事項(xiàng):

1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè),取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

5、本試劑盒定量范圍為6.25-200ng/L,超過此范圍,為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果(6.25-200ng/L范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6、若顯色過淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。

7、為避免交叉污染,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號(hào)的試劑不得混用。

9、底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

 

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