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細胞克隆實驗
應(yīng)用簡介
克隆形成及細胞克隆接種存活率，通過觀察單細胞集落形成情況，來計算克隆形成率，了解其增殖能力。
技術(shù)原理
單個細胞在體外持續(xù)增殖6代以上時細胞數(shù)量已達60個左右，此細胞群體成為克隆或集落，大小在1.0-2.0mm之間。集落形成率表示細胞的獨立生存能力，各種理化因素可能導(dǎo)致細胞的克隆形成能力發(fā)生改變，通過計數(shù)克隆形成率，可對單個細胞的增殖潛力做定量分析，了解細胞的增殖率和對生存環(huán)境的適應(yīng)性。軟瓊脂培養(yǎng)或平板克隆是zui常用的方法。
實驗方法
1、試驗成功的關(guān)鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好，不能有細胞團，接種密度不能過大。
2、細胞在進行克隆形成實驗時要求有95%以上的分散度，否則結(jié)果的準確度會受到很大影響。
3、克隆形成率公式：克隆形成率=（克隆數(shù)/接種細胞數(shù)）×100%，細胞克隆形成率即細胞接種存活率，表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數(shù)量。
4、一般初代培養(yǎng)細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形成率弱，轉(zhuǎn)化細胞系強；正常細胞克隆形成率弱，腫瘤細胞強。
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