應用簡介

帕金森氏病（Parkinson’s Disease，PD）是一種會影響運動的進行性神經系統疾病，老年人多見，平均發(fā)病年齡在60歲左右，癥狀會逐漸出現，有時始于不易察覺的單手震顫，還常導致僵硬或運動緩慢。除此之外帕金森患者也表現出了感覺障礙和認知功能障礙等非運動癥狀。

其主要病理變化是黑質致密部（SNpc）中多巴胺（DA）能神經元進行性丟失并伴有紋狀體多巴胺水平的下降、α-突觸核蛋白（α-synuclein, α-Syn））為主要成分的路易小體的形成，致使得腦部指揮肌肉活動的能力受到不同程度的限制，大大阻礙了患者的活動能力。

導致這一病理變化的確切因素尚不清楚，遺傳因素、環(huán)境因素、年齡老化、氧化應激等均可能參與PD多巴胺能神經元的變性死亡過程。

PD的發(fā)病機制和各作用靶點之間的聯系仍是現今研究的熱點，因此在基礎研究中模型的制備對PD的研究具有舉足輕重的作用。總的來說，PD模型主要分為兩類，一是誘發(fā)性動物模型，二是基因修飾動物模型。

造模方法

在注射當天配制好新鮮的MPTP溶液，然后腹腔或皮下注射MPTP。試劑要現用現配。

根據實驗要求和目的，可分為快速模型和慢速模型。

快速模型可分為單次注射和多次注射。單次注射的劑為30mg/kg，該模型損傷輕，易恢復；多次注射的劑量為20mg/kg，每隔2h注射1次，共3-4次，該模型損傷快且嚴重，DA神經元的損傷到死亡可以在3d內完成。

慢速模型需多次注射，每天1次，單次注射的劑量為20mg/kg,連續(xù)注射5-7d。該模型的成活率較高，實驗周期較長。

模型驗證：

（1）造模后進行行為學觀察參照Francois的實驗方法(包括行動遲緩實驗、抓握實驗和尾強直實驗記錄強直癥狀的變化、震顫實驗)記錄帕金森氏病的三大癥狀，觀察到小鼠出現尾巴僵硬豎直，身體出現非自主性震顫，自發(fā)活動減少，表明帕金森模型構建成功。

（2）離體腦組織中黑質、紋狀體免疫組化染色

MPTP在注射后，7d對小鼠黑質致密部（SNpc）和紋狀體（Striatum）免疫染色。結果所示，在進行造模后，小鼠紋狀體（Striatum）末端和黑質致密部（SNpc）的酪氨酸羥化酶(TH)陽性細胞體和纖維所形成的的網狀結構密度顯著降低，且TH陽性細胞數量顯著降低，TH陽性纖維密度顯著降低。

MPTP誘導的小鼠帕金森模型由于造模技術相對簡單（只需要腹腔注射）、對多巴胺神經元的殺傷效果穩(wěn)定也得到了廣泛的認可。不少關于多巴胺能神經元死亡機制方面的研究都采用MPTP誘導的小鼠帕金森模型作為實驗范式。

Tips：

（1）MPTP誘導的小鼠帕金森模型對動物的性別、體重、年齡甚至品系來源均非常敏感，因此在挑選動物的時候要十分小心。

• C57BL小鼠對MPTP最為敏感，而CF-W小鼠、FVB／N小鼠和Balb/C小鼠對MPTP的敏感性較C57BL小鼠稍差，CF-1和CD-1對MPTP的敏感性最差。目前較常用的小鼠為C57BL/6小鼠。

• 老齡鼠較青年鼠對MPTP更為敏感。

（2）在注射前務必適應性飼養(yǎng)1周左右。因為長距離運輸會改變腦的狀態(tài)，因此需要5-7天時間來使動物恢復并適應環(huán)境。

（3）未被代謝的MPTP將會隨著動物的排泄物被釋放到墊料中，因此在注射之后小鼠需要進行嚴格的隔離飼養(yǎng)。其使用的墊料、飲水必須經過無害化處理，然后作為醫(yī)療垃圾廢棄。

（4）MPTPyou劇毒，在稱量溶解和注射時一定做好個人的防護工作。