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shRNA載體構(gòu)建科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹
shRNA載體構(gòu)建
技術(shù)原理
首先設(shè)計(jì)根據(jù)需求設(shè)計(jì)shRNA引物一套，完成引物退火。將載體進(jìn)行雙酶切反應(yīng)，雙酶切后割膠回收。將shRNA和雙酶切回收后的載體，使用試劑盒進(jìn)行重組成環(huán)狀片段，轉(zhuǎn)入制備好的細(xì)菌感受態(tài)細(xì)胞，對(duì)長出的單克隆菌落送測序公司進(jìn)行測序鑒定，比對(duì)正確的克隆即為構(gòu)建成功的shRNA表達(dá)載體。
shRNA的靶點(diǎn)選擇決定著對(duì)靶向基因的表達(dá)敲低效果，通常涉及3-4個(gè)shRNA靶點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，根據(jù)后續(xù)檢測結(jié)果確定最佳靶點(diǎn)后，安排后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)方法
體內(nèi)抑制效果強(qiáng)：
shRNA表達(dá)載體生物體內(nèi)的抑制效果強(qiáng)于普通合成的siRNA，且能與組織特異性定位啟動(dòng)子協(xié)同作用。
誘導(dǎo)表達(dá)功能：
科研人員可以通過shRNA表達(dá)載體服務(wù)建立可誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)，控制siRNA的表達(dá)。
轉(zhuǎn)染細(xì)胞易富集：
載體上可附加抗生素抗性，篩除未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，輕松富集有沉默潛力的細(xì)胞。
干擾效果長期有效：
shRNA表達(dá)載體能幫助研究人員獲得穩(wěn)定細(xì)胞系，并保證RNA干擾的長期性。
實(shí)驗(yàn)操作簡便：
shRNA表達(dá)載體將以質(zhì)粒的形式寄給客戶，這種形式比一般合成的siRNA更加穩(wěn)定，操作也更加簡單。同時(shí)，由于載體可重復(fù)操作，客戶使用更加方便。
優(yōu)惠的價(jià)格：
shRNA表達(dá)載體的可重復(fù)操作性降低了其高通量應(yīng)用的價(jià)格，滿足了siRNA客戶的大量需求。
可用于基因治療：
構(gòu)建在病毒載體上的shRNA能被應(yīng)用于感染基因治療核心細(xì)胞系。
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