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番紅固綠染色
番紅-固綠染色
番紅-固綠染色(軟骨)在涉及關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨的形態(tài)學研究中，常需聯(lián)合使用多種染料以顯示其組織學結(jié)構(gòu)。其中，起源于上世紀60年代的番紅O(safranin O)-固綠(fast green)染色因可以直觀反映關(guān)節(jié)軟骨、軟骨下骨和骨組織的結(jié)構(gòu)而備受青睞。軟骨呈紅色，成骨呈綠色。
技術(shù)原理
番紅-固綠（軟骨）染色法的染色原理在于嗜堿性的軟骨和堿性染料番紅O結(jié)合呈現(xiàn)紅色，嗜酸性的骨和酸性染料固綠結(jié)合而成綠色或者藍色，與呈現(xiàn)紅色的軟骨對比鮮明，從而將軟骨組織和骨組織區(qū)分開。番紅O是一種結(jié)合多陰離子的陽離子染料，其顯示軟骨組織是基于陽離子染料與多糖中陰離子基團（硫酸軟骨素或硫酸角質(zhì)素）結(jié)合。番紅O著色與陰離子的濃度近似成正比關(guān)系，間接反映基質(zhì)中蛋白多糖的含量和分布。當軟骨收到損傷時，軟骨中的糖蛋白會釋放出來，使基質(zhì)成分分布不均勻，從而導(dǎo)致番紅O淡染或不著色。通過圖像分析軟件可以對番紅O染色的軟骨基質(zhì)進行定量分析。固綠與膠原纖維結(jié)合，不宜褪色。
實驗步驟
<番紅固綠-骨>
1、注意固綠的上色程度，番紅不要掩蓋綠色。
2、切片分化時間應(yīng)恰當，以背景呈綠色為宜。分化過度容易導(dǎo)致切片不著色，分化不足容易導(dǎo)致切片著色過深。
送樣運輸要求：
1、植物樣本置于20倍樣本體積的FAA固定液中固定24h以上，常溫運輸送樣。
2、切勿冷凍結(jié)冰。
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