NucleofectorTM技術(shù)是一種有效的、非病毒介導(dǎo)的、用于原代細(xì)胞與難轉(zhuǎn)細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染方法。

NucleofectorTM技術(shù)是一種基于通過施加電脈沖在細(xì)胞膜中瞬間產(chǎn)生小孔，綜合各種NucleofectorTM程序和細(xì)胞類型特異性電轉(zhuǎn)試劑，使核酸底物不僅可以輸送到細(xì)胞質(zhì)，還可以通過核膜進(jìn)入細(xì)胞核。這使得細(xì)胞最高轉(zhuǎn)染效率可達(dá)99%，并使轉(zhuǎn)染成功不依賴于細(xì)胞的增殖分裂。

NucleofectorTM技術(shù)-非病毒介導(dǎo)的方法

圖 1. 使用傳統(tǒng)電穿孔和核轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染NK細(xì)胞系 NKL

用 2.5ug pmaxGFP載體轉(zhuǎn)染5x106NKL 細(xì)胞。核轉(zhuǎn)染：Nucleofector Solution V；程序 0-017。競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手B電穿孔：25 mV，96μF。24小時(shí)后通過流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染效率。與通過傳統(tǒng)電穿孔轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比，通過 Nucleofection 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞顯示出明顯更好的轉(zhuǎn)染效率。在轉(zhuǎn)染后 18 小時(shí)測(cè)量的細(xì)胞活力也優(yōu)于使用 Nucleofection。

DNA遞送進(jìn)入細(xì)胞核

圖 2. 用 2.5ug TMR 標(biāo)記的質(zhì)粒DNA的編碼eGFP轉(zhuǎn)染正常人真皮成纖維細(xì)胞（新生兒）。2 小時(shí)后，用 3.5% PFA 固定細(xì)胞并通過共聚焦顯微鏡進(jìn)行分析。TMR 標(biāo)記顯示在 (A) 中，GFP 熒光顯示在 (B)，DAPI 核染色顯示在 (C) 中，所有三個(gè)熒光標(biāo)記的合并顯示在 (D)。

NucleofectorTM技術(shù)的組成

Nucleofector技術(shù)由Nucleofector儀器、細(xì)胞特異性的緩沖液和操作手冊(cè)組成。

儀器∶內(nèi)置針對(duì)各種細(xì)胞優(yōu)化好的電脈沖程序，程序可在儀器觸摸屏上直接選擇。Lonza提供了不同功能模塊平臺(tái)，可供大家選擇（X模塊，Y模塊，96孔模塊，LV模塊及384孔模塊）。

試劑盒∶試劑盒是包含有細(xì)胞特異性緩沖液，補(bǔ)充劑，專用電極耗材，pmaxGFPIM陽性質(zhì)粒等。細(xì)胞特異性緩沖液和補(bǔ)充劑為細(xì)胞轉(zhuǎn)染提供保護(hù)，既保證了高轉(zhuǎn)染效率與細(xì)胞活率，又幫助細(xì)胞維持良好的生理功能性狀。我們提供有一系列的優(yōu)化轉(zhuǎn)染試劑盒與操作手冊(cè)。

數(shù)據(jù)庫與操作手冊(cè)，在我們的數(shù)據(jù)庫中為大家提供600種以上細(xì)胞的轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)和操作手冊(cè)。優(yōu)化的操作手冊(cè)除了操作指導(dǎo)外，還包括細(xì)胞來源、傳代、生長條件、培養(yǎng)基以及轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)等細(xì)節(jié)技巧。

4D NucleofectorTM 系統(tǒng)提供更加靈活的多模塊

兼容性的模塊：X模塊

針對(duì)不同數(shù)量級(jí)的細(xì)胞，提供不同的電極耗材。X模塊可以使用兩種不同形式的聚合材料電極，分別是如下電極杯與電極板條。

*左圖為100uL電極杯；右圖為16-well 20uL電極板條

100uL電極杯

低通量但一次可轉(zhuǎn)大量細(xì)胞（適用于生化應(yīng)用或Western Blots）

16-well 20uL電極板條

中通量，低細(xì)胞數(shù)量（報(bào)告基因分析，RNAi）

貼壁轉(zhuǎn)染模塊：Y模塊

至今為止，基于電轉(zhuǎn)的方法都是要求細(xì)胞處于懸浮狀態(tài)，NucleofectorTM進(jìn)入一個(gè)新時(shí)代，細(xì)胞可以在貼壁狀態(tài)下直接轉(zhuǎn)染。維持細(xì)胞在貼壁生長生理狀態(tài)下完成轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)在24孔板上，插入電極板即可完成轉(zhuǎn)染。

-轉(zhuǎn)染前與轉(zhuǎn)染后都可在24孔板中

-可在細(xì)胞生長的任何時(shí)期進(jìn)行轉(zhuǎn)染

-成活率高，轉(zhuǎn)染高可達(dá)75%

-與CloneticsTM原代動(dòng)物神經(jīng)元兼容

中通量轉(zhuǎn)染模塊：96孔模塊

96-well模塊為一系列原代細(xì)胞和細(xì)胞系提供靈活的通量以及經(jīng)濟(jì)的處理體系、快速和預(yù)先優(yōu)化的方案。它是4D-Nucleofector設(shè)備的中等通量擴(kuò)展，適用于便捷地優(yōu)化核轉(zhuǎn)染條件或作為篩選（CRISPR screening，TCR screen-ing）的一種工具。

-每塊板最多可運(yùn)行96個(gè)獨(dú)立程序，在5分鐘內(nèi)自動(dòng)處理

-模塊化6×16 Nucleocuvette板可實(shí)現(xiàn)可擴(kuò)展的通量

-可無縫集成到自動(dòng)化液體處理系統(tǒng)中

-只需1個(gè)板即可優(yōu)化任何難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞

-每個(gè)反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)為104-105個(gè)細(xì)胞

高通量轉(zhuǎn)染模塊：384-well系統(tǒng)

384-well Nucleofector系統(tǒng)是一個(gè)獨(dú)立的平臺(tái)，用于384 孔的高通量核轉(zhuǎn)染。憑借一分鐘的極短的處理時(shí)間和高重現(xiàn)性，使它成為篩選應(yīng)用的理想工具。此外，Nucleofector溶液中的細(xì)胞儲(chǔ)存時(shí)間被縮至最短，所有現(xiàn)有的96孔Nucleofector方案無需進(jìn)一步優(yōu)化即可使用。

快速高效助力篩選

●在一分鐘內(nèi)處理一個(gè)384孔板

高性能與低材料消耗相結(jié)合

●轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)可低至2×104個(gè)細(xì)胞

易于使用和自動(dòng)化的系統(tǒng)

●使用現(xiàn)有的96孔NucleofectorTM實(shí)驗(yàn)方案

●由直觀的PC軟件操作

●無縫集成到自動(dòng)化液體處理系統(tǒng)中

大體積轉(zhuǎn)染模塊：LV模塊

4D-NucleofectorLV單元，將我們經(jīng)驗(yàn)證的4D-Nucleofector系統(tǒng)擴(kuò)展到更大規(guī)模的轉(zhuǎn)染范圍。

LV單元可以對(duì)1×107至1×109個(gè)細(xì)胞范圍內(nèi)對(duì)人原代細(xì)胞進(jìn)行封閉、可擴(kuò)展的體外修飾?？梢岳肵單元以較小的規(guī)模建立轉(zhuǎn)染方案，隨后將其轉(zhuǎn)移到LV單元，而無需重新優(yōu)化或少量的優(yōu)化。它支持多種應(yīng)用，如CAR-T細(xì)胞生成、CRISPR 基因組編輯，便于快速將研究成果轉(zhuǎn)化為符合GMP的細(xì)胞療法生產(chǎn)過程。

-封閉的系統(tǒng)-核轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)量多達(dá)109個(gè)

-規(guī)?？烧嬲糯?以少量樣品建立方法

-成熟的轉(zhuǎn)染方案-超過700多個(gè)優(yōu)化細(xì)胞類型

-操作簡單-極少的培訓(xùn)需求

-4D-NucleofectorTMLogWare-可使用符合21CFR part 11 的軟件進(jìn)行操作

-TheraPEAKTM NucleofectorTM耗材-加快滿足GMP過程要求的進(jìn)度

兩種體系可用于科研或GMP用途

*左圖為1ml電轉(zhuǎn)盒，最多可容納 1x 108細(xì)胞（通過無菌注射端口手動(dòng)填充）；右圖為20ml電轉(zhuǎn)盒，處理量高達(dá) 20mL（每次1ml），最多可容納 1x 109 個(gè)細(xì)胞（通過儲(chǔ)液罐或袋子自動(dòng)填充）

符合21CFR Part 11合規(guī)性軟件∶4D-NucleofectorTMLogware

對(duì)于4D-NucleofectorTM系統(tǒng)，龍沙提供的附件產(chǎn)品可為上游GMP制造環(huán)境中的轉(zhuǎn)染應(yīng)用提供更高的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

-符合Title21CFRPart11/annex11

-用戶管理

-帶有用戶名和密碼的電子簽名

-使用時(shí)間戳記錄任何修改、數(shù)據(jù)創(chuàng)建或用戶交互

-使用失敗描述報(bào)告結(jié)果失敗

-根據(jù)Title21CFRPart11導(dǎo)出數(shù)據(jù)

-生成審計(jì)跟蹤

-無法刪除數(shù)據(jù)