Arthrogen-CIA:致關(guān)節(jié)炎單克隆抗體5-克隆混合物試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
小鼠抗II型膠原5克隆單克隆抗體雞尾酒試劑盒,配有大腸桿菌O111:B4的內(nèi)毒素(LPS)。
艾美捷Arthrogen-CIA:致關(guān)節(jié)炎單克隆抗體5-克隆混合物試劑盒-10 mg:
貨號(hào):53010
應(yīng)用:用于小鼠膠原抗體誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CAIA)。
規(guī)格:
雞尾酒:10 mg/ml x 1 ml
LPS:0.5 mg/ml x 1.5 ml
形式:一種溶解在0.05M磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)中的5種單克隆抗體的混合物,識(shí)別多種II型膠原的保守表位:克隆A2-10(IgG2a)、F10-21(IgG2a)、D8-6(IgG2a)、D1-2G(IgG2b)和D2-112(IgG2b)。克隆A2-10、D1-2G和D2-112識(shí)別CB11片段(124-402)中167氨基酸肽片段LyC1(124-290)內(nèi)的個(gè)別表位??寺10-21和D8-6識(shí)別CB11片段中的83氨基酸肽片段LyC2(291-374)內(nèi)的表位。
來(lái)源:小鼠
交叉反應(yīng)性:對(duì)大多數(shù)II型膠原物種(包括小鼠、豬、雞*、牛、人、鼠、猴、兔、馬和狗)有交叉反應(yīng)。
D2-112不與雞II型膠原交叉反應(yīng)。
動(dòng)物:7-8周齡或更大的高反應(yīng)小鼠:DBA/1、Balb/c、B10.RIII、C.B-17、scid/scid或129/Sv。
低反應(yīng)小鼠:C57BL/6或C57BL/6背景。對(duì)CAIA的敏感性可能因小鼠供應(yīng)商和設(shè)施而異。強(qiáng)烈建議使用特定病原體陰性(SPF)飼養(yǎng)條件,而不是常規(guī)飼養(yǎng)條件,因?yàn)榧?xì)菌污染可能會(huì)降低動(dòng)物的免疫反應(yīng),導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎減弱。因此,建議在進(jìn)行大規(guī)模研究之前優(yōu)良行小規(guī)模的初步研究。
使用:建議通過(guò)靜脈注射(即尾靜脈)給藥單克隆抗體雞尾酒;不過(guò),也可以使用腹腔注射(IP)。此外,如果不希望使用LPS,請(qǐng)注意關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重程度往往較低。
儲(chǔ)存條件:-80°C
穩(wěn)定性:2年
注意事項(xiàng):
LPS是一種常見的細(xì)菌毒素,是免疫系統(tǒng)的強(qiáng)效刺激物。推薦的Arthrogen-CIA®雞尾酒協(xié)議利用LPS注射來(lái)觸發(fā)快速出現(xiàn)的重度關(guān)節(jié)炎,伴隨亞關(guān)節(jié)炎劑量的抗體。LPS的最佳劑量可能因小鼠品系、動(dòng)物供應(yīng)商和飼養(yǎng)條件而異。高劑量的LPS可能對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致命,甚至50 μg/只,具體取決于動(dòng)物的條件。因此,Chondrex, Inc.建議首優(yōu)良行無(wú)抗體給藥的初步研究,以優(yōu)化LPS劑量(50 μg、25 μg和可能的10 μg,分別測(cè)試每個(gè)劑量并使用多只小鼠),然后再進(jìn)行大規(guī)模CAIA研究。
Arthrogen-CIA:致關(guān)節(jié)炎單克隆抗體5-克隆混合物試劑盒-10 mg實(shí)驗(yàn)步驟:
A. 在CAIA易感小鼠(DBA/1、Balb/c、B10.RIII、C.B-17、scid/scid或129/Sv)中用單克隆抗體雞尾酒和LPS誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎
第0天:通過(guò)靜脈或腹腔注射1.5 mg的5克隆雞尾酒。
第3天:通過(guò)腹腔注射25-50 μg的LPS。
注意:在第3-4天觀察到中度至重度關(guān)節(jié)炎,約在第7-10天達(dá)到高峰。
B. 在CAIA低反應(yīng)小鼠(C57BL/6或C57BL/6背景)中用單克隆抗體雞尾酒和LPS誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎
第0天:通過(guò)靜脈或腹腔注射5 mg的5克隆雞尾酒。
第3天:通過(guò)腹腔注射25-50 μg的LPS。
注意:在第3-4天觀察到中度至重度關(guān)節(jié)炎,約在第7-10天達(dá)到高峰。第10-14天注射LPS可用于重新刺激炎癥性關(guān)節(jié)炎。
C. 在DBA/1和Balb/c小鼠中用不含LPS的單克隆抗體雞尾酒誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎
第0天:通過(guò)靜脈注射6-10 mg的5克隆雞尾酒。
注意:在第2-3天可觀察到關(guān)節(jié)炎。該協(xié)議尚未在其他CAIA易感小鼠品系(如B10.RIII、C.B-17、scid/scid或129/Sv小鼠)中確認(rèn)。
Arthrogen-CIA:致關(guān)節(jié)炎單克隆抗體5-克隆混合物試劑盒-10 mg文獻(xiàn)參考:
K. Terato et al. J. Immunol. 148: 2103-2108 (1992)
K. Terato et al. Autoimmunity 22: 137-147 (1995)
S. Yoshino et al. J. Immunol Methods 343: 49-55 (2009)
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