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ADI猴IgM ELISA試劑盒標本的采集和處理方案

來源:武漢艾美捷科技有限公司   2024年11月01日 16:42  

ADIIgM ELISA試劑盒標本采集和處理

通過靜脈穿刺采集血液,使其凝固,并在室溫下離心分離血清溫度。不要加熱使血清失活。如果血清沒有立即檢測,請儲存冷藏長達2周或冷凍長期儲存。避免凍融循環(huán)。血漿的使用尚未進行調查,但應該是一個合適的檢測樣本。

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艾美捷IgM ELISA試劑盒

貨號:ADI-7060

特異性:本試劑盒中使用的抗體已通過免疫電泳和ELISA證明能特異性地與IgM反應,并且與IgG、IgA、IgE或其他任何猴血清蛋白幾乎沒有反應性。

以下物種的血清在1:400稀釋下沒有顯示出顯著的反應性:

小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、牛、豬、馬、羊、山羊、狗、貓、兔子或雞;還有10%的新生牛血清。人血清顯示出廣泛的交叉反應性。

正常范圍:對14只個體恒河猴、食蟹猴和狒狒的儲存血清中的IgM進行檢測,其范圍從0.23.8 mg/ml(中位數=1.85 mg/ml)。每個實驗室應確定其自身測試群體的預期值。

精確度:含有低、中、高濃度IgM的樣本,代表3個不同物種,在同一個檢測中多次檢測(n=10)以提供檢測內的精確度,并作為多個檢測中的重復樣本(n=5)以獲得檢測間的可重復性。使用點對點曲線擬合程序計算濃度的變異系數。

IgM濃度的測量顯示出良好的檢測內(5.37.8% CV)和檢測間(4.216.2% CV)的可重復性。

 

檢測程序:

將所有試劑平衡至實驗室溫度(18-30攝氏度)至少30分鐘。

稀釋血清樣本至工作樣本稀釋液中。對于大多數正常的猴血清,大約4000倍的稀釋是合適的。為了準確性,推薦進行兩個稀釋步驟,如下:

1) 10μl血清 + 990μl稀釋液 = [1:100],

2) 25μl [1:100] + 975μl稀釋液 = [1:4000]。

不要稀釋標準品或陽性對照血清。

 

結果計算:

1. 結果可以使用任何免疫分析軟件包來計算。推薦使用四參數曲線擬合。如果沒有軟件可用,可以按照以下方法確定IgM濃度:

2. 計算重復樣本的平均OD值。

3. 在坐標紙上,將標準品的平均OD值(y軸)與IgM的濃度(ng/ml)(x軸)作圖。通過這些點繪制最佳擬合曲線以構建標準曲線。點對點的構建是最常見和可靠的方法。

4. 可以通過標準曲線的插值來確定未知樣本和對照中的IgM濃度。

5. 將樣本獲得的值乘以每個樣本的稀釋因子。

6. 對于產生高于1000 ng/ml標準信號的樣本,應進一步稀釋并重新檢測。

 

注意事項和安全指南:

猴血清可能含有人畜共患的、跨物種的傳染性物質。在處理含有血清的樣本(包括標準品和對照品)時,始終要戴手套,并把這些樣本和容器作為生物危害廢物進行處理。

校準液、樣品稀釋液和HRP標記抗體含有溴硝基二氧六環(huán)(BND0.05%,重量/體積)。

終止液含有稀釋的硫酸。請遵循良好的實驗室操作規(guī)范,避免任何試劑與皮膚、眼睛或黏膜接觸。所有試劑都可以用大量水沖入下水道。TMB、硫酸和BNDMSDS(材料安全數據表)可以從ADI網站索取或獲得:樣品稀釋液和抗蛋白G-HRP含有Proclin 3000.05%,體積/體積)。

 

質量控制:

準確和可重復的檢測結果依賴于試劑和樣本的正確儲存、處理以及溫度控制。按照指示儲存所有試劑,并僅將用于檢測的試劑回暖至室溫。關鍵試劑和樣本的保質期會因長時間暴露在非冷藏條件下而縮短,導致檢測結果不準確。

所有溶液應清澈。渾濁或有顆粒物是試劑污染或不穩(wěn)定的跡象,可能會干擾檢測的正確進行。如出現這種情況,請勿使用。

樣本對照品 試劑盒中提供了一個陽性血清對照品,并附有IgM濃度值范圍。在此范圍內的回收率是檢測性能良好的指標。

每個實驗室還應檢測內部對照樣本,這些樣本代表實驗室預期的樣本群體,并且是穩(wěn)定的。也應該運行一個樣品稀釋液陰性對照。

標準曲線 標準品產生的信號應該從低標準品到高標準品連續(xù)增加OD值,且差異大于1.2 OD。

非連續(xù)增加或低信號可能表明技術、協議指導和/或試劑準備、使用或穩(wěn)定性存在問題。陰性稀釋液對照的信號應低于低標準品。不要依賴于存在這些問題的檢測結果。

技術 準確和可重復的檢測結果依賴于良好的實驗室技術,包括移液、板洗滌和樣本及試劑的處理。

 

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