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前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒樣本的收集準(zhǔn)備及注意事項(xiàng)

來源:武漢艾美捷科技有限公司   2024年11月05日 16:39  

Cayman Chemical的前列腺素E2PGE2)單克隆ELISA試劑盒是一種競爭性檢測,可用于尿液、血漿、組織培養(yǎng)上清液以及其他樣本基質(zhì)中PGE2的定量分析。該檢測的范圍為7.8-1,000 pg/ml,靈敏度(80% B/B0)約為13 pg/ml,z低檢測限(LLOD)為11 pg/ml。本品不適用于人類或獸醫(yī)用途。

 

艾美捷前列腺素E2PGE2ELISA試劑盒

貨號:514010

同義詞:PGE2 EIA試劑盒 單克隆

檢測范圍:7.8-1,000 pg/ml

靈敏度:80% B/B013 pg/ml

中點(diǎn):50% B/B030-70 pg/ml

來源:動(dòng)物/牛,動(dòng)物/鰻魚,動(dòng)物/山羊,動(dòng)物/小鼠

儲存:-20°C

運(yùn)輸:在美國本土使用濕冰;其他地方可能有所不同

穩(wěn)定性:≥ 1

 

前列腺素E2PGE2ELISA試劑盒檢測原理:

這個(gè)檢測基于PGE?和一個(gè)PGE?-乙酰膽堿酯酶(AChE)偶聯(lián)物(PGE?追蹤器)對有限數(shù)量的PGE?單克隆抗體的競爭。由于PGE?追蹤器的濃度保持恒定,而PGE?的濃度變化,能夠與PGE?單克隆抗體結(jié)合的PGE?追蹤器的量將與孔中PGE?的濃度成反比。這種抗體-PGE?復(fù)合物與之前已經(jīng)固定在孔中的山羊多克隆抗小鼠IgG結(jié)合。然后對板進(jìn)行洗滌以去除任何未結(jié)合的試劑,接著添加Ellman試劑(其中包含AChE的底物)到孔中。這種酶促反應(yīng)的產(chǎn)物有一種明顯的黃色,并且在412納米處有強(qiáng)烈的吸收。這種顏色的強(qiáng)度,通過分光光度法測定,與孔中結(jié)合的PGE?追蹤器的量成正比,這反過來與孵育期間孔中存在的游離PGE?的量成反比;或者吸光度 c [結(jié)合的PGE?追蹤器] c 1/[PGE?]。

 

樣本準(zhǔn)備:

這項(xiàng)檢測已經(jīng)針對包括尿液、血漿和組織培養(yǎng)液在內(nèi)的廣泛樣本類型進(jìn)行了驗(yàn)證(見下圖)。正確的樣本儲存和準(zhǔn)備對于獲得一致和準(zhǔn)確的結(jié)果至關(guān)重要。在開始檢測之前,請c底閱讀本節(jié)。

 

一般注意事項(xiàng):

所有樣本在檢測前必須不含有機(jī)溶劑。

樣本應(yīng)在收集后立即進(jìn)行檢測;不能立即檢測的樣本應(yīng)儲存在-80℃。

鼠和小鼠來源的樣本可能含有干擾檢測的抗體,它們可能通過與山羊抗鼠板結(jié)合來干擾。我們建議所有鼠和小鼠樣本在使用此檢測之前進(jìn)行純化。

 

尿液

由于尿液中的干擾不常見,1:2及更高比例的稀釋顯示出PGE?免疫反應(yīng)性與PGE?濃度之間的直接線性相關(guān)性。然而,正常尿液中PGE?的含量與其他潛在的免疫活性代謝物相比非常低。使用我們的PGE代謝物酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(貨號514531),可以獲得更準(zhǔn)確的PGE?生物合成和排泄指標(biāo)。

 

血漿

收集含有肝素、EDTA或檸檬酸鈉的真空采血管中的血液。在全血收集后應(yīng)立即添加吲哚美辛(足夠達(dá)到最終濃度10微摩爾)。吲哚美辛將阻止體外環(huán)氧二十碳烯酸的生成,這些物質(zhì)有可能干擾此檢測。

正常血漿中PGE?的含量與其他潛在的免疫活性代謝物相比非常低。此外,血漿是一個(gè)復(fù)雜的基質(zhì),含有許多可能干擾此檢測的物質(zhì),因此建議對樣本進(jìn)行純化。通過純化大量樣本(5-10毫升),可以將PGE?含量濃縮至僅0.5毫升的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)緩沖液中。這將使PGE?濃度進(jìn)入標(biāo)準(zhǔn)曲線的可讀范圍。使用我們的PGE代謝物酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(貨號514531),可以獲得更準(zhǔn)確的血漿中PGE?生物合成指標(biāo)。

11.png

.PGE?測定的驗(yàn)證曲線

 

培養(yǎng)基樣品

細(xì)胞培養(yǎng)上清液可以直接測定,無需純化。如果培養(yǎng)基中的PGE?濃度足夠高,可以用ELISA緩沖液將樣品稀釋10倍,則可以在不進(jìn)行任何修改的情況下進(jìn)行測定。當(dāng)使用濃度較低的樣品(樣品不能用ELISA緩沖液稀釋)時(shí),在與實(shí)驗(yàn)中使用的培養(yǎng)基相同的培養(yǎng)基中稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線。這將確保標(biāo)準(zhǔn)的矩陣與樣品具有可比性。我們建議首先運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線,以確保該試劑在特定的培養(yǎng)基中表現(xiàn)良好。

 

組織樣本

收集后立即在液氮中快速冷凍組織,然后在-80℃下儲存。向1 g組織中加入5 ml勻漿緩沖液(0.1 M磷酸鹽,pH 7.4,含有1 mM EDTA10μM吲哚美辛)。用Polytron型均質(zhì)器或聲波儀均質(zhì)化樣品。繼續(xù)進(jìn)行下面的凈化部分。或者,冷凍樣品可以在乙醇存在下粉碎,以提取PGE?。

 

使用Precellys 24均質(zhì)機(jī)進(jìn)行組織均質(zhì)化

收集后立即在液氮中快速冷凍組織,并在-80℃下保存。每100 mg組織添加1 mM高均化緩沖液(0.1Mp磷酸鹽緩沖液,pH7.4,含有1 mM EDTA10μM吲哚美辛)。使用適當(dāng)?shù)脑O(shè)置用Precellys 24均質(zhì)化樣品(見表1)。將組織勻漿以8000克的速度旋轉(zhuǎn)10分鐘。收集上清液并按照下文所述進(jìn)行分析。樣品需要適當(dāng)稀釋以進(jìn)行測定。組織樣本應(yīng)使用蛋白質(zhì)測定法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。Cayman的蛋白質(zhì)測定試劑盒(項(xiàng)目編號704002)可用于使蛋白質(zhì)樣本標(biāo)準(zhǔn)化。


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