隨著蛋白質(zhì)科學(xué)的飛速發(fā)展，蛋白純化技術(shù)在生物研究領(lǐng)域和生物技術(shù)工業(yè)中的重要性日益凸顯。這一核心技術(shù)涉及利用基因工程方法，將目標(biāo)蛋白的編碼信息整合入宿主細(xì)胞，從而誘導(dǎo)它們高效地生產(chǎn)所需蛋白。隨后，通過(guò)一系列精細(xì)的體外操作步驟實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)的高純度提取。蛋白純化使得科學(xué)家能分離出單一類型的蛋白質(zhì)，這對(duì)于深入研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能、開(kāi)發(fā)新藥、進(jìn)行疾病診斷以及推動(dòng)生物技術(shù)的應(yīng)用至關(guān)重要。該技術(shù)不僅確保了科學(xué)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，還為生命科學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展提供了持續(xù)的動(dòng)力。

圖1.親和層析原理圖[1]

在蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域，融合標(biāo)簽作為一種強(qiáng)大的工具，通過(guò)與目標(biāo)蛋白結(jié)合以促進(jìn)實(shí)現(xiàn)各種實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，常?jiàn)融合標(biāo)簽的功能可參考下表。然而，一旦這些標(biāo)簽在完成其初始輔助功能后繼續(xù)殘留在融合蛋白上，可能會(huì)對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)造成不良影響，如干擾動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)或影響蛋白的生物學(xué)活性。因此，去除這些不再需要的融合標(biāo)簽變得至關(guān)重要，以確保蛋白質(zhì)的正常功能和實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

表1.常見(jiàn)融合標(biāo)簽功能及酶切手段介紹

今天，我們隆重向您推介一款高效精準(zhǔn)去除融合標(biāo)簽的產(chǎn)品——UCF.ME® rTEV Protease，憑借其簡(jiǎn)潔易操作的實(shí)驗(yàn)流程，此款酶能夠便捷地從融合蛋白中切除無(wú)需的標(biāo)簽，進(jìn)而獲得高純度的目標(biāo)蛋白。

UCF.ME® rTEV Protease

TEV Protease 是一種廣泛應(yīng)用于切除重組蛋白融合標(biāo)簽的蛋白酶，以其高度的位點(diǎn)特異性而著稱。它嚴(yán)格識(shí)別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，在谷氨酰胺和甘氨酸或絲氨酸之間進(jìn)行精確剪切，其中最常見(jiàn)的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。這種特異性確保了蛋白加工過(guò)程中的精確性和效率。

圖2.TEV蛋白酶作用原理圖[2]

翌圣UCF.ME® rTEV Protease 是一款經(jīng)過(guò)基因工程改良和精細(xì)純化的重組蛋白酶，它不僅保留了天然TEV酶的完整功能活性，而且在更廣泛的溫度范圍內(nèi)展現(xiàn)出的穩(wěn)定性和特異性。該產(chǎn)品在rTEV Protease (Cat#20403)基礎(chǔ)上進(jìn)行了工藝優(yōu)化，其純度更高、活性更強(qiáng)、宿主gDNA殘留更低，確保在實(shí)際應(yīng)用中對(duì)蛋白融合標(biāo)簽的切割效率更高，且能有效降低引入外源物質(zhì)殘留的風(fēng)險(xiǎn)。UCF.ME® rTEV Protease在pH 7.0和30°C的條件下表現(xiàn)出最佳活性，但即使在pH 6.0-8.5、溫度4-30°C的廣泛條件下也保持活性，以適應(yīng)不同蛋白質(zhì)加工需求。值得一提的是，UCF.ME® rTEV Protease 的N端帶有6×His標(biāo)簽，可通過(guò)Ni-NTA樹(shù)脂進(jìn)行高效去除，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的精準(zhǔn)純化。

性能展示

1. 剪切效率高：蛋白標(biāo)簽切除

以含有UCF.ME® rTEV Protease剪切位點(diǎn)的融合蛋白（3 μg）為底物，分別投入U(xiǎn)CF.ME® rTEV Protease 10、5、3 U，在30℃條件下反應(yīng)1 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)剪切效果。結(jié)果顯示翌圣的UCF.ME® rTEV Protease在投入量為3 U以上時(shí)，可高效剪切底物，剪切效率＞90%。

圖2.UCF.ME® rTEV Protease剪切活性驗(yàn)證

2. 宿主gDNA殘留低：有效降低引入外源物質(zhì)殘留的風(fēng)險(xiǎn)

通過(guò)對(duì)不同批次的UCF.ME® rTEV Protease進(jìn)行宿主（大腸桿菌）gDNA殘留檢測(cè)，結(jié)果顯示UCF.ME® rTEV Protease宿主gDNA殘留遠(yuǎn)低于< 1copies/U。

圖3.UCF.ME® rTEV Protease宿主gDNA殘留結(jié)果

3. 適用條件廣泛：可適應(yīng)不同蛋白質(zhì)加工需求

通過(guò)對(duì)UCF.ME® rTEV Protease不同條件下的剪切活性進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示UCF.ME® rTEV Protease在4-30℃條件下均有較強(qiáng)的活性，可適配客戶不同應(yīng)用場(chǎng)景需求。

翌圣融合標(biāo)簽切割蛋白產(chǎn)品推薦

參考文獻(xiàn)：

[1] Parikh I , Cuatrecasas P .Affinity Chromatography[J].Vox Sanguinis, 1972, 23(1-2):141-146.DOI:10.1159/000466530.

[2] Paththamperuma C, Page R C. Fluorescence dequenching assay for the activity of TEV protease[J]. Analytical biochemistry, 2022, 659: 114954.