HEK293瞬轉表達培養(yǎng)基可實現細胞快速生長維持細胞高活率及蛋白該表達

來源：上?；菡\生物科技有限公司 2025年02月08日 13:35

上海惠誠生物提供的HEK293 瞬轉表達基礎培養(yǎng)基（Basal Medium）與補料培養(yǎng)基（Feed Medium）是完(空)全化學成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何動物來源的成分，適合于不同亞型 HEK293 細胞的高密度懸浮培養(yǎng)，可實現重組蛋白和抗體的高水平表達：培養(yǎng) 5 天表達量在200mg/L 左右，7 天表達量 500mg/L 左右，部分可達 1g/L 以上。

上?；菡\生物提供的HEK293 瞬轉表達培養(yǎng)基已完成美國 DMF 登記（DMF039790），更有力的支持客戶需求。

HEK293 細胞培養(yǎng)基產品描述

名稱	備注	谷氨酰胺	葡萄糖	生長因子	適用細胞
HEK293 CD05	初始培養(yǎng)基	含	6 g/L	不含	Expi293F 等
HEK293 FM01AB	補料培養(yǎng)基	不含	60g/L	不含
HEK293 enhancer	分泌性蛋白表達增強劑	不含
PEI	轉染試劑	0.5mg/mL

推薦使用說明

步驟	使用方法
關鍵參數匯總	轉染時細胞密度：3~5e6 cells/mL, DNA: 1.3mg/L, PEI:4mg/L
細胞傳代	0.3 e6 cells/mL 接種，3 天傳代一次，當細胞倍增時間不低于對照培養(yǎng)基時認為細胞完(空)全適應新培養(yǎng)基，進入下一步驟
轉染前一天	細胞密度調整到~2 e6 cells/mL 左右
質粒與 PEI 預處理	以 20mL 培養(yǎng)體積為例（其他培養(yǎng)體積，相關試劑需要按體積折算） 1：取 160uL Trans PEI (母液是 0.5mg/mL),加入 1mL HEK293 CD05 培養(yǎng)基混合均勻； 2：像 1）中混合液體中加入 26ug 的質粒（即質粒用量 1.3mg/L)，混合均勻； 3: 靜止 15~20min
轉染	1：用新鮮培養(yǎng)基調整細胞密度至 3~5 e6cells/mL (很重要）； 2：緩慢滴加上述 PEI 與 DNA 的混合物，并搖動搖瓶使混合物均勻分散； 3：轉染當日記為 Day0，放入 37℃搖床中，完成轉染；
補料培養(yǎng)	1：轉染后~24h 內補加 0.5%的 HEK293 enhancer （且只分泌性蛋白或抗體需要添加，膜蛋白無需加 HEK293 enhancer）和 7%的 HEK293 FM01AB； 2：Day4 再補加一次 7%的 HEK293 FM01AB 和 3g/L 的葡萄糖（如培養(yǎng)時間≤5 天，此步忽略）； 3：活力≤70%即可培養(yǎng)結束或其他指(空)定培養(yǎng)基時間
溫度及其他參數	1：溫度 37℃，不降溫 2：搖床轉速 120rpm, 50mm 振幅，5-8% CO2；

產品運輸及存儲

運輸：常溫或冷鏈運輸；

存儲：2~8℃，干燥、避光保存；

有效期：基礎培養(yǎng)基干粉：2 年；

基礎培養(yǎng)基液體：1 年；

補料培養(yǎng)基干粉：2 年；

補料培養(yǎng)基液體：1 年（開封后建議在 3 個月內使用完）。

應用范圍

上?；菡\生物生物提供的培養(yǎng)基可用于 HEK293 細胞凍存、復蘇、傳代、高密度強化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)，可

實現細胞快速生長，維持細胞高活率及蛋白該表達。

使用指南

細胞凍存

1．準備處于對數生長期狀態(tài)較好的細胞，且細胞活率在 90%以上；

2．檢測活細胞密度，計算所需的凍存培養(yǎng)基體積，計算最終細胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；

3．準備好所需的凍存培養(yǎng)基：90%基礎培養(yǎng)基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；

4．設置離心力 200×g，離心 5 min，用凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞至凍存體積；

5．將懸浮細胞等分保存至適宜規(guī)格的細胞凍存管中；

6．將細胞凍存管置于程序降溫盒中，按照降溫標準進行降溫；

7．將細胞轉移到液氮罐中保存。

細胞復蘇

1．提前打開水浴鍋，并設置溫度至 36.5℃~37.0℃；

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