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實時熒光定量PCR(qPCR)是在普通PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程。在PCR反應(yīng)早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產(chǎn)生進入指數(shù)期、線性期和平臺期，可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點上來檢測PCR產(chǎn)物的量，并且由此推斷模板的含量，實時熒光定量PCR儀主要由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成。熒光定量系統(tǒng)負責(zé)監(jiān)測循環(huán)過程中的熒光信號，而與之相連的計算機則收集這些熒光數(shù)據(jù)。通過專門的實時分析軟件，數(shù)據(jù)可以以圖表的形式顯示出來，便于研究人員進行分析。
實時熒光定量PCR儀以其高靈敏度、高特異性、高準(zhǔn)確性和高速度的特點，被廣泛應(yīng)用于各種生命科學(xué)研究領(lǐng)域和臨床診斷中。
基因表達分析：可以用來分析基因的表達水平，包括mRNA轉(zhuǎn)錄量的定量、差異表達基因的篩選以及研究基因調(diào)控機制等。這為基因功能研究提供了重要數(shù)據(jù)支持。
病原微生物檢測：在病原微生物檢測中具有高度靈敏度和特異性，可以快速、準(zhǔn)確地檢測微生物的存在和數(shù)量。這使其成為疾病診斷、傳染病監(jiān)測以及食品安全檢測等領(lǐng)域的重要工具。
基因突變檢測：可以檢測DNA序列的變異和突變，包括單核苷酸多態(tài)性(SNP)、插入缺失(InDel)等。這些檢測對于疾病遺傳學(xué)研究、個體基因分型以及法醫(yī)學(xué)鑒定等領(lǐng)域具有重要意義。
DNA定量分析：還可用于定量分析DNA樣本的濃度和純度，常用于核酸提取、質(zhì)量控制以及實驗前的標(biāo)準(zhǔn)化處理等。
病毒載量檢測：實時熒光定量PCR也被廣泛應(yīng)用于檢測病毒感染樣本中病毒的載量，如HIV、HPV、流感病毒等。這有助于醫(yī)學(xué)研究人員了解病毒感染的程度和傳播動態(tài)。
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