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超微量分光光度計的工作原理及應用

來源:曦源科學儀器(上海)有限公司   2025年03月18日 09:00  

1. 引言

超微量分光光度計(Nano spectrophotometer)是一種基于紫外-可見光(UV-Vis)分光光度法的高精度檢測儀器,廣泛用于生物醫(yī)學、環(huán)境分析和材料科學等領(lǐng)域。其主要優(yōu)勢在于可測量極微量樣品(0.5–2 µL),無需比色皿,大大降低了樣品損耗。本文將詳細介紹其工作原理及應用。

2. 工作原理

2.1 光源與光譜測量

超微量分光光度計通常采用氙燈或LED作為光源,覆蓋200–900 nm的波長范圍。光束穿過待測樣品后,未被吸收的部分由檢測器(如光電二極管或CCD陣列)接收,以計算樣品的吸光度。

2.2 比爾-朗伯定律

光吸收特性遵循比爾-朗伯定律(Beer-Lambert Law):

其中:

  • 為吸光度

  • 為摩爾消光系數(shù)(與物質(zhì)特性相關(guān))

  • 為溶液濃度(mol/L)

  • 為光程長度(cm)

超微量分光光度計通常采用固定光程(如0.5 mm 或 1 mm),可直接計算樣品濃度,無需額外稀釋。

2.3 樣品檢測方式

與傳統(tǒng)分光光度計不同,超微量分光光度計采用納米樣品平臺(NanoDrop技術(shù)),通過表面張力固定微量液滴(如1 µL),無需比色皿,從而減少樣品浪費。

3. 主要應用

3.1 核酸檢測

  • DNA/RNA濃度測定:通過測量260 nm波長的吸光度(A260)計算核酸濃度。

  • 純度評估:常用A260/A280比值(≈ 1.8 表示純DNA,≈ 2.0 表示純RNA)判斷蛋白質(zhì)污染。

3.2 蛋白質(zhì)分析

  • 通過280 nm波長測定蛋白質(zhì)吸光度(A280)。

  • 利用布拉德福德法(Bradford Assay)或雙縮脲法(BCA Assay)進行定量分析。

3.3 其他應用

  • 細胞培養(yǎng)液的濃度測定

  • 納米材料溶液的光學特性分析

  • 環(huán)境樣品(如水污染物)的檢測

4. 結(jié)論

超微量分光光度計以其高靈敏度、低樣品需求和便捷操作的特點,在生命科學和材料研究領(lǐng)域具有廣泛應用。隨著技術(shù)的發(fā)展,其檢測精度和自動化水平將進一步提高,為科學研究和工業(yè)生產(chǎn)提供更加高效的分析工具。

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