細胞因子在免疫細胞功能評估時有著不可替代的作用，然而這些關(guān)鍵分子在體外誘導及檢測時卻異常“嬌氣”，操作細節(jié)稍有不慎，實驗結(jié)果就會南轅北轍。你是否也因此而頭疼？今天Elabscienc化身細節(jié)控的救星，從實驗原理到閉坑指南，助你逐一拆解，告別無效實驗！

一、 為什么需要進行細胞因子體外誘導表達和檢測

細胞因子是一類由免疫細胞和非免疫細胞分泌的小分子蛋白，通過動態(tài)平衡的網(wǎng)絡(luò)形式，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)以及組織修復(fù)等重要生物過程。例如，M1型巨噬細胞分泌促炎性細胞因子（如TNF-α、IL-1α、IL-6等），以推動炎癥反應(yīng)，但持續(xù)的炎癥也可能導致組織損傷。而M2型巨噬細胞則通過分泌抑炎性細胞因子（如IL-10、TGF-β）以及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF），減輕炎癥并促進修復(fù)。因此，細胞因子在評估免疫細胞功能時具有不可替代的作用。

由于細胞因子為分泌性蛋白，其在細胞胞內(nèi)的含量通常較低，無法通過流式細胞術(shù)直接檢測，此時需要將目的細胞分選后在體外進行刺激阻斷后才能進行檢測。此外，為了驗證特定基因或處理方式（如給藥、抑制劑處理等）對目的細胞的影響，需要在體外進行誘導處理使其成為特定的細胞亞群，如誘導Th1/Th2/Th17細胞或M1/M2型巨噬細胞等，此時細胞因子的誘導表達和檢測尤為重要。

二、 進行細胞因子的體外誘導和檢測時，需要注意哪些細節(jié)

雖然多數(shù)常用細胞因子模型的體外誘導模型容易在文獻中搜索得到，但在實際操作過程中可能復(fù)現(xiàn)結(jié)果并不理想?；?/span>Elabscience®在細胞因子誘導及檢測實驗中的經(jīng)驗，小E老師為大家總結(jié)以下幾點可能的影響因素：

1、細胞的活性：某些細胞（如NK細胞、小膠質(zhì)細胞）的活性易受環(huán)境的影響，因此需要更輕柔地處理細胞，盡量避免對細胞的損傷。在進行下游誘導表達前，建議進行細胞活性檢測或去除死細胞，以確保實驗結(jié)果的準確性；

2、細胞亞群間的相互影響：不同細胞亞群之間可能存在相互抑制或轉(zhuǎn)化現(xiàn)象，例如TH1與TH2細胞之間相互抑制、M2型巨噬細胞可能向M1型轉(zhuǎn)化。因此在選用誘導細胞時需要特別注意，如誘導Th2細胞時，選用初始CD4 T細胞的效果比總CD4 T細胞的效果更好，因為能夠排除Th1的影響；

3、誘導試劑的活性：不同廠家的同一誘導試劑可能存在純度和活性差異，需要提前確認相關(guān)信息，選用純度和活性更高的試劑。同時，部分試劑無法反復(fù)凍融、或溶解后活性下降快或容易吸附，因此需特別注意保存條件，盡量分裝保存，并盡快使用；

4、刺激阻斷的影響：在進行細胞內(nèi)的細胞因子檢測時，常用刺激阻斷劑進行處理。部分細胞因子對刺激阻斷的處理敏感，處理后檢測效果可能降低（如圖1）。因此，在使用刺激阻斷劑前，應(yīng)確認其是否為必須操作，并優(yōu)化處理時間；

圖1. 刺激阻斷對CD4 T細胞中IL-3檢測的影響

使用磁性分選試劑盒EasySort™ Mouse CD4+T Cell Isolation Kit（MIM002N）分選小鼠CD4 T細胞后使用Mouse CD3/CD28 T Cell Activation Beads（MIM001A）激活T細胞并同時加入IL-2和IL-4進行培養(yǎng)，5天后直接檢測細胞中IL-3的表達（左圖）和刺激阻斷后檢測細胞中IL-3的表達（右圖）。

三、 Elabscience®細胞鑒定試劑盒

在前文的實驗細節(jié)中，無論是細胞活性波動、亞群相互干擾，還是試劑穩(wěn)定性不足，都可能成為實驗結(jié)果的“隱形殺手”。 為了解決廣大科研er在細胞模型構(gòu)建中遇到的問題，Elabscience®可提供細胞鑒定試劑盒系列產(chǎn)品，試劑盒包含分化誘導試劑和鑒定試劑，產(chǎn)品性能優(yōu)異，結(jié)果重復(fù)性佳：

以上就是本期細胞因子體外誘導表達及檢測的所有內(nèi)容了，如有相關(guān)問題，歡迎小伙伴們在后臺留言或在線聯(lián)系我們，我們將及時解答！