以下簡單介紹用FACS分析檢測跨膜型TNF。
1.材料
①含2%人血清,0.1%疊氮鈉的PBS;
②FITC標記的TNF單克隆抗體;
③羊或兔抗TNF多克隆抗體及F1TC標記的羊抗兔IzC。
2.操作步驟
(1)單核細胞加或不加激活劑,37℃培養(yǎng)一定時間。
(2)2000rpm離心10min,棄上清。
(3)用含2%人血清/0.1%疊氮鈉的PBS懸浮細胞。
(4)將105細胞廳L0口人圓底96孔培養(yǎng)板,并加FITC標記的TNF單抗冰上放置20min。如無FITC標記的TNF單抗,可按(5)~(7)步驟操作。
(5)加1:500稀釋的兔抗TNF多抗,冰上放置20min。
(6)用PBS洗一次,以去除未結合的抗體。
(7)再加1:500稀釋的FITC標記的羊抗兔ISC,置冰上20min。
(8)PBS洗4次后,用流式細胞儀分析熒光標記陽性細胞百分率及平均熒光強度。
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