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不同品牌的熒光染料對(duì)Qubit RNA IQ Assay Kit檢測(cè)原理有何影響?

來源:上海易匯生物科技有限公司   2025年05月01日 17:21  
不同品牌的熒光染料對(duì)Qubit RNA IQ Assay Kit檢測(cè)原理有何影響?
Qubit RNA IQ Assay Kit 通常使用的是 Invitrogen 公司專有的熒光染料,不同品牌的熒光染料可能在多個(gè)方面影響該試劑盒的檢測(cè)原理及結(jié)果:

  • 結(jié)合特性不同

    • 特異性:Qubit RNA IQ Assay Kit 的原配熒光染料對(duì) RNA 具有高度特異性,能準(zhǔn)確結(jié)合 RNA,排除其他生物分子如 DNA、蛋白質(zhì)等的干擾。若使用其他品牌熒光染料,可能無(wú)法如此精準(zhǔn)地特異性結(jié)合 RNA,比如一些染料可能也會(huì)與 DNA 有一定程度的結(jié)合,從而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果中 RNA 濃度出現(xiàn)偏差,因?yàn)闄z測(cè)到的熒光信號(hào)可能包含了 DNA 與染料結(jié)合產(chǎn)生的部分。

    • 結(jié)合位點(diǎn)與親和力:原配熒光染料與 RNA 的結(jié)合位點(diǎn)和親和力經(jīng)過精心設(shè)計(jì),可保證在一定條件下與 RNA 充分且穩(wěn)定結(jié)合,準(zhǔn)確反映 RNA 的量。不同品牌染料的結(jié)合位點(diǎn)和親和力可能不同,可能無(wú)法在相同條件下與 RNA 達(dá)到最佳結(jié)合狀態(tài),例如結(jié)合過強(qiáng)可能導(dǎo)致染料難以從 RNA 上解離,影響檢測(cè)的動(dòng)態(tài)范圍;結(jié)合過弱則可能在檢測(cè)過程中染料脫落,使熒光信號(hào)不穩(wěn)定,最終影響濃度測(cè)定的準(zhǔn)確性。

  • 熒光特性差異

    • 激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng):Qubit 儀器是根據(jù)原配熒光染料的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)特性進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)的。其他品牌熒光染料的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)可能與原配染料不同,若使用這些染料,Qubit 儀器可能無(wú)法提供合適的激發(fā)光,或者不能有效檢測(cè)到發(fā)射光,導(dǎo)致無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量熒光信號(hào)強(qiáng)度,進(jìn)而無(wú)法準(zhǔn)確得出 RNA 濃度。

    • 熒光量子產(chǎn)率:熒光量子產(chǎn)率決定了熒光染料在吸收光能后發(fā)射熒光的效率。原配熒光染料具有較高且穩(wěn)定的量子產(chǎn)率,能保證在與 RNA 結(jié)合后產(chǎn)生較強(qiáng)且穩(wěn)定的熒光信號(hào),以實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確檢測(cè)。不同品牌的染料量子產(chǎn)率可能較低,產(chǎn)生的熒光信號(hào)較弱,增加了檢測(cè)的背景噪音,降低了檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性;或者量子產(chǎn)率不穩(wěn)定,會(huì)使熒光信號(hào)隨時(shí)間或環(huán)境條件變化而波動(dòng),影響結(jié)果的重復(fù)性。

  • 對(duì) RNA 質(zhì)量評(píng)估的影響

    • 片段大小區(qū)分能力:Qubit RNA IQ Assay Kit 的原配染料通過對(duì)不同大小 RNA 片段的熒光信號(hào)分布分析,來評(píng)估 RNA 的完整性,如計(jì)算 RIN 值和 28S/18S 比值等。不同品牌的熒光染料可能對(duì)不同大小 RNA 片段的結(jié)合特性不同,無(wú)法準(zhǔn)確反映不同片段的真實(shí)分布情況,導(dǎo)致計(jì)算出的 RIN 值和 28S/18S 比值不準(zhǔn)確,不能真實(shí)反映 RNA 的質(zhì)量。

    • 構(gòu)象敏感性:原配熒光染料對(duì) RNA 的二級(jí)結(jié)構(gòu)等構(gòu)象有一定的敏感性,能更全面地評(píng)估 RNA 的質(zhì)量。而其他品牌染料可能對(duì) RNA 構(gòu)象不敏感,無(wú)法檢測(cè)到 RNA 結(jié)構(gòu)變化對(duì)其質(zhì)量的影響,從而使檢測(cè)結(jié)果不能準(zhǔn)確反映 RNA 的實(shí)際質(zhì)量狀況。


由于不同品牌的熒光染料在結(jié)合特性、熒光特性以及對(duì) RNA 質(zhì)量評(píng)估方面與 Qubit RNA IQ Assay Kit 原配熒光染料存在差異,會(huì)影響試劑盒檢測(cè)原理的實(shí)現(xiàn),導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確、不可靠,因此不建議在該試劑盒中隨意使用其他品牌的熒光染料。



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