細(xì)胞培養(yǎng)箱作為細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵設(shè)備,其內(nèi)部環(huán)境的無(wú)菌狀態(tài)直接關(guān)系到細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量與成敗。因此,掌握科學(xué)有效的消毒滅菌方法至關(guān)重要。
一、消毒滅菌前準(zhǔn)備
清空培養(yǎng)箱首先,需要將培養(yǎng)箱內(nèi)的所有物品,如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液器等實(shí)驗(yàn)器具全部取出,避免在消毒滅菌過(guò)程中對(duì)物品造成損壞或影響消毒效果。同時(shí),對(duì)取出的物品進(jìn)行分類(lèi)整理,以便后續(xù)分別進(jìn)行清潔和消毒處理。
清潔培養(yǎng)箱內(nèi)部使用干凈的軟布或無(wú)紡布蘸取適量的清水或溫和的清潔劑,輕輕擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)部的墻壁、擱板、門(mén)內(nèi)襯等各個(gè)表面,去除灰塵、污漬以及可能殘留的培養(yǎng)基等物質(zhì)。注意擦拭時(shí)要避免過(guò)度用力,防止損壞培養(yǎng)箱的內(nèi)膽涂層。對(duì)于一些難以擦拭的角落和縫隙,可以使用棉簽或小型刷子進(jìn)行清理。
二、常用消毒滅菌方法
1、紫外線照射消毒紫外線消毒是一種較為常用的方法。大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)箱都配備有紫外線燈,開(kāi)啟紫外線燈后,其發(fā)出的紫外線能夠破壞微生物的DNA結(jié)構(gòu),從而達(dá)到殺菌消毒的目的。一般照射時(shí)間不少于30分鐘,以確保對(duì)培養(yǎng)箱內(nèi)部各個(gè)角落的微生物進(jìn)行有效殺滅。不過(guò),紫外線的穿透力較弱,對(duì)于一些遮擋部位或物體背面的消毒效果可能會(huì)受到一定影響,所以需要合理擺放物品,保證紫外線能夠充分照射到所有需要消毒的區(qū)域。
2、酒精擦拭消毒可以選用70%-75%的酒精溶液對(duì)培養(yǎng)箱內(nèi)部進(jìn)行擦拭消毒。將適量的酒精倒在干凈的軟布上,然后按照從上到下、從左到右的順序,仔細(xì)擦拭培養(yǎng)箱的內(nèi)壁、擱板等部位。酒精具有較強(qiáng)的揮發(fā)性,擦拭后能快速干燥,不留殘留,且能有效殺滅多種細(xì)菌和病毒。但要注意酒精屬于易燃易爆物品,在使用過(guò)程中要遠(yuǎn)離明火,并確保培養(yǎng)箱處于良好的通風(fēng)狀態(tài),防止酒精揮發(fā)積聚產(chǎn)生爆炸危險(xiǎn)。
3、高溫濕熱消毒(部分適用)對(duì)于一些能夠耐受高溫濕熱的細(xì)胞培養(yǎng)箱部件,如某些金屬材質(zhì)的擱板等,可以采用高溫濕熱消毒的方法。將部件放入高壓蒸汽滅菌鍋中,在合適的溫度(通常為121℃左右)和壓力下,保持一定的時(shí)間(如15-30分鐘),利用高溫高壓的水蒸氣來(lái)殺滅微生物。不過(guò),并非所有的細(xì)胞培養(yǎng)箱部件都能進(jìn)行高溫濕熱消毒,比如一些塑料材質(zhì)的部件可能會(huì)因高溫而變形損壞,所以需要謹(jǐn)慎選擇此方法,并嚴(yán)格按照設(shè)備的說(shuō)明書(shū)要求操作。
4、化學(xué)消毒劑熏蒸消毒常用的化學(xué)消毒劑如過(guò)氧乙酸、甲醛等可以進(jìn)行熏蒸消毒。以過(guò)氧乙酸為例,按照一定的濃度(如0.5%-1%)稀釋后,將盛有消毒劑的容器放入培養(yǎng)箱內(nèi),然后密封培養(yǎng)箱,通過(guò)加熱或其他方式讓消毒劑揮發(fā),使其在培養(yǎng)箱內(nèi)擴(kuò)散,對(duì)空氣和各個(gè)表面進(jìn)行消毒。熏蒸時(shí)間一般根據(jù)培養(yǎng)箱的大小和消毒劑的濃度而定,通常需要數(shù)小時(shí)甚至更長(zhǎng)。消毒結(jié)束后,要充分通風(fēng)換氣,去除殘留的消毒劑氣味和毒性,以免對(duì)后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生不良影響。
三、消毒滅菌后的注意事項(xiàng)
通風(fēng)換氣無(wú)論采用哪種消毒滅菌方法,消毒完成后都需要對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)箱進(jìn)行充分的通風(fēng)換氣,將殘留的消毒劑氣味、霧氣等排出箱外,讓培養(yǎng)箱內(nèi)的空氣質(zhì)量恢復(fù)到正常狀態(tài),為細(xì)胞培養(yǎng)創(chuàng)造一個(gè)良好的環(huán)境。
檢測(cè)無(wú)菌效果為了確保消毒滅菌效果,可以在消毒后的培養(yǎng)箱內(nèi)放置一些無(wú)菌指示劑,如無(wú)菌試紙、菌落測(cè)試片等,經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的培養(yǎng)后,觀察指示劑的變化情況,判斷培養(yǎng)箱內(nèi)是否達(dá)到了無(wú)菌狀態(tài)。如果發(fā)現(xiàn)仍有微生物存在,需要重新進(jìn)行消毒滅菌操作。
盡快放入已消毒物品并開(kāi)始使用經(jīng)過(guò)消毒滅菌后的細(xì)胞培養(yǎng)箱,應(yīng)盡快將已經(jīng)過(guò)消毒處理的實(shí)驗(yàn)器具、培養(yǎng)液等物品放入其中,然后啟動(dòng)培養(yǎng)程序,避免長(zhǎng)時(shí)間空置導(dǎo)致外界微生物再次污染。
總之,細(xì)胞培養(yǎng)箱的消毒滅菌工作需要嚴(yán)謹(jǐn)對(duì)待,選擇合適的消毒滅菌方法,并嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行,才能保證細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的無(wú)菌和穩(wěn)定,為細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的成功提供有力保障。
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