UbiTest試劑盒用于確定靶蛋白是否被多泛素化。這一強(qiáng)大的平臺是對研究蛋白質(zhì)泛素化常用方法的改進(jìn)：免疫沉淀和Western blot分析。然而，在免疫印跡步驟中，底物抗體通常會與底物的多泛素化形式產(chǎn)生不同的相互作用。這是由于表位掩蓋、親和力降低或選擇性變化。一種更明確的證明蛋白質(zhì)泛素化的方法是，在免疫印跡分析之前，將免疫沉淀與廣譜去泛素化酶（DUB）消化相結(jié)合。經(jīng)過DUB處理后，目標(biāo)蛋白（POI）的信號增加，這清楚地表明該蛋白即使在未處理的樣本中沒有明確的反應(yīng)性，也已被泛素化。為了避免因POI免疫反應(yīng)性變化而可能產(chǎn)生的問題，UbiTest檢測利用TUBEs來捕獲多泛素化蛋白。TUBEs（串聯(lián)泛素結(jié)合實體）是經(jīng)過工程改造的串聯(lián)泛素結(jié)合域，其與四聚泛素的解離常數(shù)在納摩爾范圍內(nèi)。TUBE1已被證明能夠結(jié)合所有8種連接類型。

艾美捷UbiTest磁性TUBE洗脫試劑盒（#UM-0411M-1000）組成：

試管1 — TUBE 1（高容量磁性珠子）——1 mL懸浮液，建議用于1-2 mg總細(xì)胞裂解物的捕獲，使用100 µL懸浮液。

緩沖液：PBS，pH 7.2，20%乙醇

儲存：請將磁性TUBE1保存在4°C。不要離心、干燥或冷凍珠子。

試管2 — 洗滌緩沖液——2 mL

試管3 — 洗脫緩沖液——1 mL

試管4 — 10X中和緩沖液（使用前加入β-巰基乙醇至最終濃度為10 mM，例如加入5 uL 1 M β-巰基乙醇溶液）——0.5 mL

試管5 — 廣譜DUB——25 ug，10 uM

儲存：-80°C

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UbiTest磁性TUBE洗脫試劑盒應(yīng)用：

從細(xì)胞和組織提取物中方便地一步捕獲多泛素化蛋白

分離多泛素化蛋白用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究

確認(rèn)靶蛋白的多泛素化

真正的多泛素化證明——無需質(zhì)譜

輕松比較處理樣本之間的多泛素化水平

輕松篩選多個目標(biāo)蛋白

無需底物純化