基于已知對(duì)泛素具有親和力的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域，串聯(lián)泛素結(jié)合實(shí)體（Tandem Ubiquitin Binding Entities，TUBEs）已被開發(fā)用于分離和鑒定泛素化蛋白。TUBEs對(duì)多泛素化結(jié)構(gòu)的親和力比單個(gè)泛素結(jié)合相關(guān)結(jié)構(gòu)域（UBA）高出多達(dá)1000倍。此外，TUBEs對(duì)多泛素化蛋白具有保護(hù)作用，使其即使在相對(duì)低豐度的情況下也能被檢測(cè)到。這些特性有效地“捕獲”了處于多泛素化狀態(tài)的蛋白質(zhì)。UM502M是通過(guò)涂覆高容量磁性珠子設(shè)計(jì)而成的，能夠高效富集多泛素化蛋白，同時(shí)最大限度地減少與組織和細(xì)胞裂解物中蛋白質(zhì)的非特異性結(jié)合。

艾美捷TUBE 2（高容量磁珠）：

貨號(hào)：UM-0502M-1000  

親和標(biāo)簽：不適用  

純度：（偶聯(lián)前）通過(guò)SDS-PAGE分析，純度>95%  

分子量：不適用  

數(shù)量：1 mL磁性珠子  

物理狀態(tài)：液體  

儲(chǔ)存：+4°C。避免在更低溫度下儲(chǔ)存  

應(yīng)用：  

從細(xì)胞系、組織和器官中捕獲多泛素化蛋白  

保護(hù)多泛素化蛋白免受去泛素化和蛋白酶體降解  

基于磁珠的ELISA用于研究泛素化蛋白質(zhì)組  

無(wú)標(biāo)記質(zhì)譜泛素化蛋白質(zhì)組分析  

TUBE 2（高容量磁珠）圖片：

圖1. 使用UM502M富集總泛素化蛋白質(zhì)組。  

將100 uL UM502M磁性珠子加入到300 ug的HeLa細(xì)胞裂解物中，這些細(xì)胞經(jīng)以下處理：DMSO和1 uM MG-132處理4小時(shí)。數(shù)據(jù)顯示了使用UM502M在4°C下通過(guò)端到端旋轉(zhuǎn)器對(duì)DMSO和MG-132處理的裂解物進(jìn)行過(guò)夜富集的結(jié)果。對(duì)于蛋白酶體抑制劑（MG-132）處理的樣本，觀察到特征性的增強(qiáng)泛素化條帶，表明對(duì)總多泛素化蛋白質(zhì)組的高效捕獲。富集后的珠子在10% SDS-PAGE和Western blot分析之前，用30 uL 1X Laemmli樣品緩沖液重懸，使用抗泛素抗體（VU101）進(jìn)行檢測(cè)。

文獻(xiàn)參考：

1. Hjerpe, R, Aillet, F, Lopitz-Otsoa, F, Lang, V, England, P, and Rodriguez, MS., Efficient protection and isolation of ubiquitylated proteins using tandem ubiquitin-binding entities. EMBO Rep. 10,1250-1258 (2009).

2. Stormo, Adrienne ED, Farbod Shavarebi, Molly FitzGibbon, Elizabeth M. Earley, Hannah Ahrendt, Lotus S. Lum, Erik Verschueren et al (2022) "The E3 ligase TRIM1 ubiquitinates LRRK2 and controls its localization, degradation, and toxicity." Journal of Cell Biology 221, no. 4.

3. Sarbanes, Stephanie L., Vincent A. Blomen, Eric Lam, S?ren Heissel, Joseph M. Luna, Thijn R. Brummelkamp, Erik Falck-Pedersen, H-Heinrich Hoffmann, and Charles M. Rice. (2021) "E3 ubiquitin ligase Mindbomb 1 facilitates nuclear delivery of adenovirus genomes." Proceedings of the National Academy of Sciences 118, no. 1: e2015794118