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RIPA 裂解液

MCE 國(guó)際站：RIPA Lysis Buffer (Strong)

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-K1001

中文名稱：RIPA 裂解液 (強(qiáng))

存儲(chǔ)條件：-20℃，1 年

產(chǎn)品活性：MCE RIPA Lysis Buffer (Strong)?是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞、組織快速裂解液，適用于 Western Blot (WB)、免疫沉淀 (IP) 及免疫共沉淀 (Co-IP) 等實(shí)驗(yàn)。

生物活性：MCE RIPA 裂解液 (Radio Immunoprecipitation Assay Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞、組織快速裂解液，根據(jù)其裂解強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類。RIPA 裂解液適用于 Western Blot (WB)、免疫沉淀 (IP) 及免疫共沉淀 (Co-IP) 等實(shí)驗(yàn)，例如大部分抗原表位的檢測(cè)、胞漿磷酸化蛋白和細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子檢測(cè)等。 MCE RIPA 裂解液 (強(qiáng))的主要成分為 50 mM Tris (pH 7.4)，150 mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及 sodiumorthovanadate，EDTA 等。RIPA 裂解液 (強(qiáng)) 不含全面的蛋白酶或磷酸酶抑制劑。為有效的防止蛋白降解，建議添加全面的蛋白酶和磷酸酶抑制劑。

描述及優(yōu)勢(shì)：

MCE RIPA 裂解液 (Radio Immunoprecipitation Assay Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞、組織快速裂解液，根據(jù)其裂解強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類。RIPA 裂解液適用于 Western Blot (WB)、免疫沉淀 (IP) 及免疫共沉淀 (Co-IP) 等實(shí)驗(yàn)，例如大部分抗原表位的檢測(cè)、胞漿磷酸化蛋白和細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子檢測(cè)等。

MCE RIPA 裂解液 (強(qiáng))的主要成分為 50 mM Tris (pH 7.4)，150 mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及 sodiumorthovanadate，EDTA 等。RIPA 裂解液 (強(qiáng)) 不含全面的蛋白酶或磷酸酶抑制劑。為有效的防止蛋白降解，建議添加全面的蛋白酶和磷酸酶抑制劑。

操作流程：1. 裂解細(xì)胞樣品 1.1 取適當(dāng)量的裂解液，如有需要，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 Protease Inhibitor Cocktail (HY-K0010)，Phosphatase Inhibitor Cocktails (HY-K0021、HY-K0022、HY-K0023) 或 Deacetylase Inhibitor Cocktail (HY-K0030)，具體操作可參考相關(guān)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。準(zhǔn)備好置于冰上備用。 1.2 貼壁細(xì)胞 去除培養(yǎng)液，用預(yù)冷的 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗 2 遍 (洗去血清中 IgG 干擾對(duì) IP 和 Co-IP 實(shí)驗(yàn)是有益的，但對(duì) WB 可能并非必要)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預(yù)冷的裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。冰上放置 5-10 分鐘，期間劇烈震蕩 3-4 次，每次 30 秒，以充分裂解。 懸浮細(xì)胞 . 離心收集細(xì)胞，棄上清，用預(yù)冷的 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗 2 遍 (洗去血清中 IgG 干擾對(duì) IP 和 Co-IP 實(shí)驗(yàn)是有益的，但對(duì) WB 可能并非必要)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預(yù)冷的裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必須分裝成 0.5-5 × 106 cells/管，然后再裂解。冰上放置 5-10 分鐘，期間劇烈震蕩 3-4 次，每次 30 秒，以充分裂解。充分裂解后，14,000 g 低溫離心5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的WB、IP 等操作。也可用液氮速凍后放 –80°C 長(zhǎng)期保存。 注：一般每 0.5-5 × 106 細(xì)胞用 1 mL 的 RIPA 裂解液裂解。細(xì)胞數(shù)量較高時(shí)，可加大裂解液用量 2. 裂解組織樣品 2.1 取適當(dāng)量的裂解液，如有需要，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 Protease Inhibitor Cocktail (HY-K0010)，Phosphatase Inhibitor Cocktails (HY-K0021、HY-K0022、HY-K0023)或 Deacetylase Inhibitor Cocktail (HY-K0030)，具體操作可參考相關(guān)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。準(zhǔn)備好置于冰上備用。 2.2 將組織置于小皿中，冰上操作，剪切成細(xì)小的碎片。 2.3 按照每 20 mg 組織加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預(yù)冷的裂解液。如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。 2.4 用玻璃勻漿器冰上均質(zhì) 30-50 次，或超聲破碎細(xì)胞，每次 30 秒，3-4 次，每次間隔 1 分鐘，置于冰上冷卻。均質(zhì)或超聲破碎細(xì)胞后應(yīng)鏡檢，細(xì)胞破碎率不小于 90%，同時(shí)組織已經(jīng)完-全裂解，沒(méi)有明顯的小組織塊。 2.5 將勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管，冰上放置 5-10 分鐘，期間劇烈震蕩 3-4 次，每次 30 秒，以充分裂解。 充分裂解后，14,000 g 低溫離心 5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、WB 和免疫沉淀等操作。 注：每 20 mg 凍存的小鼠肝臟組織用200 μL 本裂解液裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為 15-25 mg/mL，不同狀態(tài)的不同組織有所不同。

熱-銷產(chǎn)品：Remdesivir  | Ionomycin (calcium)  | SAG  | Divarasib  | Lactate

Trending products：Recombinant Proteins  |  Natural Products  |  Fluorescent Dye  |  PROTAC  |   Oligonucleotides