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CCK-8 細(xì)胞活力檢測試劑盒技術(shù)詳解

來源:上海易匯生物科技有限公司   2025年06月18日 16:05  
CCK-8 細(xì)胞活力檢測試劑盒技術(shù)文章
(一)產(chǎn)品概述
CCK-8(Cell Counting Kit-8)細(xì)胞活力檢測試劑盒是一種基于 WST-8(水溶性四唑鹽)的高靈敏度、便捷的細(xì)胞活力檢測工具。試劑盒主要包含 CCK-8 溶液、細(xì)胞培養(yǎng)基、陽性對照品等組分。其中,CCK-8 溶液是核心試劑,WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物,可被細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶還原為水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物,該產(chǎn)物的生成量與活細(xì)胞數(shù)量成正比,通過測定其在特定波長下的吸光度,即可準(zhǔn)確反映細(xì)胞活力。
(二)技術(shù)原理
CCK-8 檢測的原理基于細(xì)胞內(nèi)脫氫酶的活性。當(dāng) CCK-8 溶液加入到含有細(xì)胞的培養(yǎng)體系中時,WST-8 可穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)?;罴?xì)胞中的線粒體脫氫酶能夠?qū)?WST-8 還原為橙黃色的甲臜,而死細(xì)胞由于缺乏活性的脫氫酶,無法進(jìn)行該還原反應(yīng)。在 450nm 波長處測定甲臜產(chǎn)物的吸光度,其吸光度值與活細(xì)胞數(shù)量呈良好的線性關(guān)系。通過建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可根據(jù)吸光度值準(zhǔn)確計算出細(xì)胞活力和細(xì)胞數(shù)量。與傳統(tǒng)的 MTT 法相比,CCK-8 法生成的甲臜產(chǎn)物水溶性好,無需裂解細(xì)胞,避免了操作過程中因細(xì)胞裂解不等因素導(dǎo)致的誤差,使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確、穩(wěn)定 。
(三)應(yīng)用領(lǐng)域與實際案例
  1. 藥物研發(fā):在新藥篩選和藥物毒性評估中,CCK-8 細(xì)胞活力檢測試劑盒被廣泛應(yīng)用。例如,在抗腫瘤藥物研發(fā)過程中,科研人員將不同濃度的候選藥物作用于腫瘤細(xì)胞系,一定時間后加入 CCK-8 溶液檢測細(xì)胞活力。通過計算藥物對細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50),評估藥物的抗腫瘤活性和毒性,為藥物研發(fā)提供重要數(shù)據(jù)支持,篩選出具有潛力的候選藥物。

  1. 細(xì)胞生物學(xué)研究:在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等基礎(chǔ)細(xì)胞生物學(xué)研究中,該試劑盒用于實時監(jiān)測細(xì)胞狀態(tài)。如在干細(xì)胞分化研究中,使用 CCK-8 檢測不同誘導(dǎo)條件下干細(xì)胞的活力變化,判斷細(xì)胞是否成功分化以及分化過程中細(xì)胞活力的動態(tài)變化,為揭示細(xì)胞分化機(jī)制提供依據(jù) 。

  1. 毒理學(xué)研究:在評估化學(xué)物質(zhì)、環(huán)境污染物等對細(xì)胞的毒性作用時,CCK-8 法是常用的檢測手段。例如,檢測重金屬離子對肝細(xì)胞的毒性,將肝細(xì)胞暴露于不同濃度的重金屬溶液中,利用 CCK-8 試劑盒檢測細(xì)胞活力,確定重金屬的毒性劑量和作用機(jī)制,為環(huán)境安全評估和毒理學(xué)研究提供數(shù)據(jù)。

(四)使用方法與注意事項
  1. 使用方法

  • 細(xì)胞接種:將對數(shù)生長期的細(xì)胞消化后,用培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度,接種到 96 孔板中,每孔加入適量細(xì)胞懸液,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

  • 藥物處理(如需):根據(jù)實驗?zāi)康?,向孔中加入不同濃度的藥物或處理因素,繼續(xù)培養(yǎng)一定時間。

  • CCK-8 檢測:向每孔加入適量 CCK-8 溶液,輕輕混勻后,將 96 孔板放回培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時(具體時間根據(jù)細(xì)胞類型和實驗條件確定)。

  • 吸光度測定:使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測定各孔的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算細(xì)胞活力和細(xì)胞數(shù)量。

  1. 注意事項

  • 試劑儲存:CCK-8 試劑盒應(yīng)避光保存于 4℃冰箱,避免反復(fù)凍融,否則會影響試劑活性。

  • 操作規(guī)范:實驗過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則,避免污染。加入 CCK-8 溶液時,避免產(chǎn)生氣泡,以免影響吸光度測定。

  • 干擾因素:某些具有還原性的物質(zhì)可能會與 WST-8 發(fā)生反應(yīng),影響檢測結(jié)果,實驗前需評估樣品中是否存在此類干擾物質(zhì),并進(jìn)行相應(yīng)處理。

  • 對照設(shè)置:實驗中應(yīng)設(shè)置空白對照(只含培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液)、陰性對照(正常培養(yǎng)的細(xì)胞)和陽性對照(已知具有細(xì)胞毒性或促進(jìn)細(xì)胞生長作用的物質(zhì)處理的細(xì)胞),確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性 。

CCK-8 細(xì)胞活力檢測試劑盒憑借其操作簡便、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)勢,在生物技術(shù)多個領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,其應(yīng)用場景將進(jìn)一步拓展,同時也將推動相關(guān)技術(shù)的持續(xù)創(chuàng)新和優(yōu)化 。



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